Modulación térmica ambiental de la actividad enzimática digestiva en el lagarto Liolaemus darwinii, de los Médanos Grandes, San Juan, Argentina BARAUNA A.A.
1, 2 ;
SANABRIA E.A.
1
3,4
; CABRILLANA M.E.
2
5,6
3
Inst. Sup. de Formación Doc. Leonardo Murialdo P-36; Esc. 4-216, Nolo Tejón; CONICET, Fac. de Filosofía 4 5 Humanidades y Artes, Un. Nac. de San Juan; ICB, Fac. de Cs. Exactas y Naturales, UNCuyo; Lab. de Inv. 6 Andrológicas de Mendoza, Inst. de Histología y Embriología de Mza., CONICET; Fac. de Cs. Médicas, UNCuyo
INTRODUCCIÓN Las sensibilidades térmicas de los procesos anabólicos y catabólicos de digestión, varían de acuerdo a la cantidad de comida que puede ser procesada, digerida y absorbida por las paredes del intestino delgado. En tales procesos, la actividad enzimática se encuentra estrechamente vinculada a la temperatura ambiente en ectotermos y se ve aumentada con el ascenso de la misma.
OBJETIVO Estudiar la variación de la actividad enzimática de la enzima digestiva tripsina, en función de la temperatura ambiente, en el intestino delgado y el páncreas del lagarto Liolaemus darwinii.
METODOLOGÍA ACLIMATACIÓN DESCRIPCIÓN DE LA ESPECIE •Psamófilo •Insectívoro •LHC: 65 mm •Típico de ambientes de monte DISTRIBUCIÓN •Desde La Rioja hasta Chubut
•Mantenidos en incubadora a 25° durante 5 días •Fotoperíodo 12:12 (luz/oscuridad) •Alimentados ad libitum con larvas de Tenebrio molitor
PROTOCOLO EN EL LABORATORIO 1) Preparado de soluciones
2) Homogenización •Se homogenizaron ambos tejidos en mezcla con las soluciones preparadas
INTESTINO DELGADO •Tritón x 100 al 10% PÁNCREAS •154 mM NaCl
TRATAMIENTO •15 individuos (Masa corporal: 4,05±1,27 grs.) separados en 3 grupos de 5 individuos cada uno •Cada grupo de aclimató a una temperatura ambiente diferente (15°, 33° y 40° C)
SACRIFICIO
3) Centrifugado INTESTINO DELGADO •14.000 rpm, por 60 minutos a 4°C PÁNCREAS •11.400 rpm, por 20 minutos a 4°C
En intestino delgado no se observaron diferencias significativas entre las diferentes temperaturas de aclimatación (Kruskal-Wallis test: H (2, N=11)=2,09; p=0,35; Fig. a). En contraste, las mediciones realizadas en tejido pancreático mostraron una mayor actividad enzimática a 40°C, siendo esta estadísticamente diferente con la actividad obtenida a los 15°C, (KruskalWallis test: H (2, N=9)=6,44; p=0,039; Fig. b).
Fig. 1: Variación de la actividad enzimática de tripsina en intestino delgado (a) y páncreas (b) en función a la temperatura de aclimatación Fig. 1: Variation of trypsin activity in the thin intestine (a) and pancreas (b) according to the temperature of acclimatization
E-mail contacto:
[email protected]
•Se colectó el sobrenadante y se lo almacenó a -80°C
5) Medición de la actividad enzimática • Se siguió el protocolo del Kit Thermo Scientific Pierce Protein Biology, N°Cat.: 23263. •pH: 8 •T°: 37°C
•Lidocaína al 2% •Extracción de intestino delgado y páncreas •Almacenamiento a -20°C
RESULTADOS
4) Almacenamiento
DISCUSIÓN La aclimatación a diferentes temperaturas no presentó ningún efecto sobre la actividad enzimática intestinal de los lagartos. En contraposición, en páncreas si se observaron diferencias significativas entre las temperaturas de aclimatación. Estos resultados, sugieren por un lado, que a bajas temperaturas la actividad de tripsina en páncreas es escasa o nula, debido a que estaría por debajo de su óptimo térmico, y por otro, que un aumento de la temperatura provocaría un ascenso en la secreción de tripsina. No obstante, una exposición a altas temperaturas extremas implicaría un estrés físico que superaría todo efecto positivo en las tasas catalíticas. Son necesarios más estudios para entender la variación en el efecto termodinámico. Hasta ahora, la mayor parte de la evidencia encontrada apunta a que los organismos se benefician de la adaptación a temperaturas elevadas.
