Lisis celular por medio de detergentes

September 11, 2017 | Autor: Luis Jimenez | Categoría: Molecular Biology, Biology
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Descripción

Lisis celular por medio de detergentes 
Es una manera más suave de romper la membrana celular.Los detergentes rompen la barrera lipídica solubilizando las proteínas e interrumpiendo la interacción lípido-lípido, lípido-proteína y proteína-proteína. Los detergentes, al igual que los lípidos, se asocian entre ellos y se unen a superficies hidrofóbicas. Al romperse las membranas celulares se permite la salida del ADN al exterior.
¿Para qué sirve la pizca de sal que ponemos en la mezcla? 
La sal en disolución actúa disminuyendo la solubilidad de las proteínas, lo que hace que precipiten y se separen más fácilmente del ADN. La acción de la sal es cubrir los terminales fosfatos negativos, permitiendo así que los extremos se unan y el ADN precipite en la solución de alcohol.

-¿Cual es la acción del alcohol?
La acción del alcohol es limpiar el ADN de otras biomoleculas a traves de la precipitacion. En este proceso el alcohol hace que el ADN pierda contacto con las moleculas de agua que lo rodean y lo aisla de la solucion acuosa. El ADN es soluble en agua, pero cuando se encuentra en alcohol se desenrolla y precipita en la interfase entre el alcohol y el agua.
Adn es puro?
- El producto filamentoso obtenido de la extracción no es ADN puro ya que, entremezclado con él, hay fragmentos de ARN.
CTAB
El Bromuro de hexadeciltrimetilamonio o Bromuro de cetiltrimetilamonio ((C16H33)N(CH3)3Br) es una sal de amonio cuaternario, uno de cuyos grupos alquilo es de gran longitud, con actividad detergente. Es un surfactante catiónico. Sus usos incluyen la utilización como solución tamponante para la extracción de ADN. El CTAB es un detergente catiónico que tiene la propiedad de precipitar ácidos nucléicos y polisacaridos ácidos en soluciones de baja concentración iónica. Bajo estas condiciones las proteinas y los polisacáridos neutros permanecen en solución. En soluciones de alta concentración iónica el CTAB forma complejos con las proteínas y polisacáridos pero no precipita ácidos nucleicos. Por esta razón es especialmente útil para precipitar ADN genómico de organismos que producen grandes cantidades de polisacáridos como las plantas y algunas bacterias Gram negativas (incluyendo algunas cepas de E. coli).
EDTA
El ácido etilendiaminotetraacético, Los agentes quelantes (como elEDTA) se emplean para proteger el ADN de la acción de enzimas nucleasas; ellos capturan los iones magnesio y no permiten que actúen como cofactores de las nucleasas.
NaCl
Las altas concentraciones (5 M) de NaCl se emplean para prevenir la contaminación de la muestra con polisacáridos que afectan la pureza del ADN, pudiendo inhibir la actividad de algunas encimas como inhibir la actividad de algunas enzimas como polimerasas, ligasas y endonucleasas de restricción; la base para la separación de los polisacáridos de los ácidos nucleicos, es su solubilidad diferencial en presencia de las altas concentraciones de NaCl los polisacáridos precipitan bajo la acción de fuerzas centrifugas.
isopropanol, el cual es selectivo en la precipitación del ADN en presencia de ARN.
TRIS (Hidroximetil amino metano). Es un tampón bioló¬gico, cuya función es mantener el pH de la solución cons¬tante (pH 7.0 - pH 8.0). Se prepara a pH 8.0.
NaCI (Cloruro de sodio). Las sales aumentan el poder iónico de la solución y ocasionan la precipitación del ADN.
MERCAPTOETANOL Es un antioxidante, escinde enla¬ces disulfuro y forma disulfuros. Se usa para ayudar en la desnaturalización de estructuras ricas en GC. Es general-mente usado en caso de que la plantilla tenga largas se-cuencias de G y C. Es generalmente usado como un agente anti-oxidante / reductor y estabiliza las enzimas.

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