GUIA PROCEDIMIENTOS TOX BIOL

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TOXICOLOGIA
Desde Sócrates, condenado a beber la cicuta en el año 399 AC, a Grigori Rasputin místico ruso supuestamente viviendo a pesar de ingerir diez veces la cantidad letal de cianuro en 1916, e incluso de ficción en la Bella Durmiente, la intoxicación ha sido una forma popular para poner fin a un adversario en historias durante miles de años.
Hasta 1840, la intoxicación se pensaba a menudo una forma de "salirse con la suya", y funcionó porque no había signos visibles de juego sucio. En ese año, una mujer francesa llamada Marie Lafarge se convirtió en la primera persona en ser declarada culpable de asesinato por envenenamiento gracias a nuevos métodos para las pruebas de arsénico, y nació el campo de la toxicología forense.
La toxicología es el estudio de los efectos adversos de las sustancias químicas en los organismos vivos. Toxicología Forense lleva un paso más allá, incluyendo un número de disciplinas afines para ayudar en la detección e interpretación de las drogas y venenos en las investigaciones médico-legales de la muerte, los problemas de rendimiento humano; por ejemplo, conducir bajo los efectos, cumplimiento y otros asuntos relacionados. En estas investigaciones, los tres objetivos principales (respectivamente) son:
Establecer si las sustancias tóxicas están presentes y capaces de contribuir a
muerte.
Establecer si las sustancias tóxicas están presentes y capaces de provocar cambios de comportamiento.
Establecer si las sustancias están presentes y si son o no
el uso o la exposición legítima, como los medicamentos prescritos o exposición profesional.
La Toxicología forense también se puede utilizar para determinar las drogas y la dosificación para los pacientes del hospital, por ejemplo en la monitorización terapéutica y toxicología clínica de emergencia; identificar los crímenes de los que se utilizan sustancias tóxicas para sedar; resolver los casos de conducción de vehículos bajo la influencia; y establecer si los fármacos se han utilizado para mejorar el rendimiento humano, como en el deporte
"Dopaje"

Análisis Toxicológico en la Investigación de la Muerte (post-mortem)
Paracelso, Científico del siglo XVI, nos dio el adagio "la dosis hace el veneno". Básicamente, él supuso que una cierta cantidad de cada sustancia, incluso el agua y el aire, puede ser tóxico y esas cantidades pueden diferir un poco de persona a persona y sustancia a sustancia. Ahí radica uno de los desafíos más básicos de toxicología: ¿es la cantidad de la toxina o la composición de la persona?
En Toxicología forense se aplica toxicología analítica para los fines de la ley, e incluye el análisis de una variedad de fluidos y muestras de tejido para determinar la ausencia o presencia de drogas y venenos. Una vez que el componente analítico está completo, el toxicólogo tiene los aspectos igualmente difíciles de interpretar el hallazgo.
Las muestras destinadas a las pruebas de toxicología suelen ser recogidas por el patólogo forense (que también puede ser un "médico legista" nombrado o "forense" en algunas jurisdicciones) o técnico mortuorio durante una autopsia. Las muestras deben estar debidamente identificadas, etiquetadas y selladas tan pronto como sea posible después de la recolección.
Todas las muestras que pertenecen a un caso deben ser recogidas y empaquetados por separado en contenedores a prueba de manipulaciones.
Sellos numerados únicos se utilizan para realizar un seguimiento de todas las pruebas para cada caso. Al igual que cualquier otra evidencia, la cadena de
la custodia debe ser preservada en todo momento.
Tabla 1 (a continuación) ofrece una instantánea de los tipos de muestras comúnmente solicitados en la investigación de diferentes formas de muerte, aunque puede haber necesidades de casos únicos que deben abordarse para algunas investigaciones.
Por ejemplo, la exposición a sustancias volátiles requiere una muestra del líquido en el pulmón. Restos óseos pueden ser útiles para determinar la exposición previa a las drogas y otras sustancias. En estos casos, el cabello también puede ser muestra

Tipo de caso de muerte
muestras recomendadas
Los suicidios, accidentes de tránsito y los accidentes industriales
Sangre, orina, humor vítreo, hígado
Los homicidios y / o sospechosas
Sangre, orina, humor vítreo, gástrico
contenido, bilis, hígado, cabello
Relacionada con drogas
Sangre, orina, humor vítreo, el contenido gástrico, bilis, el hígado, el cabello
Abuso de sustancias volátiles
Sangre, orina, humor vítreo, líquido pulmonar o cuñas de pulmón, hígado
Intoxicación por metales pesados y la exposición a otros venenos

Sangre, orina, humor vítreo, hígado, pelo, riñón




Análisis toxicológico en Delitos contra la Integridad Sexual

La entrevista inicial de la presunta víctima, el examen sistemático posterior, por un profesional de la salud y recogida de muestras biológicas son etapas importantes en la primera fase de una investigación DFSA (delito sexual facilitado por drogas). Si bien el cuidado de la presunta víctima es de primordial importancia también debe estar enfocado en la preservación de la evidencia del delito.
La evidencia en un delito contra la integridad sexual (hisopos: vaginal y anal para investigación de espermatozoides y eventual pruebas de ADN, descripción y fotos de lesiones) debe ser recogida y documentada por el profesional de la salud con cuidado. Es importante que el profesional de la salud tenga la formación forense adecuada y con calificación para reunir pruebas que se utilizará en los casos penales.

La evidencia biológica, se debe obtener tan pronto como sea posible, se debe disponer de un kit de recolección de pruebas en DFSA (delito sexual facilitado por drogas), y debe ir acompañada de la cadena adecuada. Las muestras biológicas deben recogerse idealmente antes de administrar cualquier medicamento a la víctima, pero si esto no es posible, todos estos medicamentos deben ser documentados. Las muestras deben estar correctamente etiquetadas con la fecha y la hora de la recogida y las iniciales de la persona que recolecto.

Las muestras recolectadas deben ser inmediatamente selladas y almacenadas de forma segura.

Aunque cada caso tiene su propia historia y peculiaridades que pueden justificar el uso de una muestra sobre otra, la orina suele ser la muestra de elección para una investigación toxicológica con sospecha de delito sexual facilitado por drogas (DFSA). En comparación con la sangre, muestras de orina permiten una ventana de tiempo de detección de fármacos y metabolitos. Estas muestras deben ser recogidas y refrigeradas lo antes posible. Cuanto más pronto una muestra de orina se obtiene después del supuesto evento, mayor será la probabilidad de detectar drogas que se elimina rápidamente del cuerpo.
La evidencia obtenida de la víctima de un presunto DFC (Delito facilitado con drogas) debe estar debidamente sellada y asegurada. Las muestras biológicas deben almacenarse a 2-8 ° C para ayudar a prevenir la degradación. Las muestras deben ser transportadas refrigeradas al laboratorio lo antes posible; en todo caso, minimizar el tiempo que se mantienen a temperaturas
por encima de 25 ° C.


Los Kits de pruebas en delitos contra la integridad sexual deben contener:
Instrucciones y directrices de recogida de pruebas.
Información de identificación única para cada kit y para cada elemento en el kit.
Bolsas autosellantes para cada exposición.
Sello de Evidencia
Bolsas de papel para la ropa y los objetos.
Papel (que cubre la superficie del suelo) para recoger pruebas, mientras la denunciante se desviste.
Tubos de 5 ml para recolección de sangre con conservantes de oxalato de fluoruro de sodio / potasio (concentraciones recomendadas para NaF 2,5 g / l de potasio y oxalato de 2g / l) para el análisis toxicológico (tubos de sangre deben estar completamente llenos).
Hisopos bucales o tubo de sangre 5 ml con potasio-EDTA para análisis genético
Dos frascos de plástico, para orina, recipientes estériles sin conservantes
Hisopos Estériles, para cavidades corporales y superficies (por ejemplo, para muestra rastros de esperma, sangre y saliva).
Solución salina fisiológica para el enjuague vaginal o anal y/o humedecer hisopos estériles si fuera necesario.
Aplicadores de madera para recoger pruebas de debajo de las uñas.
Guantes, red de pelo y máscara para el colector.
Formulario de Cadena de custodia

Muestras Biológicas y de muestreo
Orina
La orina debe ser recogida dentro de las primeras 120 horas (5 días) del presunto delito contra la integridad sexual. En realidad muchas de las sustancias pueden haber sido eliminadas de la orina en menos de 120 horas, algunas pueden permanecer en baja concentración. Un mínimo de 50 ml de orina debe ser recogida en por lo menos dos recipientes estériles
(sin conservante necesario) y se almacena a 2-8 ° C. Si no es posible analizar las muestras dentro de las 24 horas, es aconsejable almacenar las muestras en un congelador (-18 °C). Muestras no utilizadas deben almacenarse en un congelador, 12 meses para análisis más detallado.

Sangre Entera
La sangre se debe recoger, además de la orina, preferiblemente dentro de las 48 horas del supuesto incidente. Las muestras de sangre se deben obtener con jeringas desechables; el uso de etanol u otros disolventes con fracciones volátiles deben evitarse en la desinfección de la piel.
Al menos dos muestras de 5 ml se deben recoger en tubos para sangre que contengan compuestos tales como NaF y oxalato de potasio (concentraciones recomendadas para NaF 2,5 g / l y oxalato de potasio 2 g / l) para impedir la degradación y la coagulación, una muestra se utilizada para el análisis y otra se retendrá en caso de nuevo análisis solicitado por la defensa. Las muestras de sangre deben ser refrigerados (2-8 ° C) tan pronto como sea posible. Si no es posible llevar a cabo análisis dentro de 24 horas, es aconsejable para preservar la muestra en un congelador (después de separar el plasma).
Además, es aconsejable que residuos de las muestras se almacenen en un congelador (-18 ° C) en caso de que se solicitan más análisis en una fecha posterior. En los casos en que se necesite plasma sanguíneo, la separación debe hacerse antes de la congelación de la sangre entera.

Cabe señalar que los plazos previstos para la detección de drogas en la orina y la sangre son pautas generales y que muchos fármacos ya no se detectaran en muestras convencionales, tales como la orina, a los cuatro o cinco días después de la ingestión.

Cabello
En los casos de exposición crónica a una sustancia, se debe recoger pelo de la cabeza, al menos cuatro semanas después del supuesto abuso sexual.
Al menos dos muestras de cabello (grosor de un lápiz) deben cortarse lo más cerca del cuero cabelludo como sea posible. Es muy importante que el pelo se muestree de manera estricta por personal debidamente capacitado.
En los casos de una cabeza rapada, el cabello puede también ser recogido para su análisis de región púbica, axilar, el torso o la pierna, aunque la interpretación de los resultados cuantitativos en estos casos sigue siendo muy difícil.
Cuando el análisis segmental no es posible (aunque sólo axilar, torso o pelo de la pierna están disponibles), el análisis se podría eventualmente limitar a un análisis cualitativo, debido a que la tasa de crecimiento no está bien establecida, como sucede en el pelo de la cabeza.
En consecuencia, un resultado positivo en este tipo de muestras de cabello indica que la supuesta víctima consumió el compuesto en cualquier momento, pero no necesariamente en el momento del hecho.
Las muestras de pelo deben almacenarse a temperatura ambiente, en un ambiente seco y protegido de la luz.


Otras muestras biológicas
En algunos casos, el vómito de la escena del presunto delito o de la ropa de la víctima puede ser una muestra de útil. Si un medicamento no está totalmente absorbido antes de que ocurra el vómito, la droga puede ser detectada en cantidades relativamente altas en una mancha de vómito.
Una vez recogido el vómito o una mancha de vómito, deben almacenarse preferiblemente en congelación.

Un hallazgo toxicológico negativo no excluye el uso de un medicamento en un posible caso DFSA. Los resultados negativos pueden deberse a:

Recolección de la muestra en forma tardía, resultando concentraciones del fármaco y / o de metabolitos por debajo de la MRPL (cantidad límite mínima de rendimiento requerido) en el laboratorio (revisar tiempo de vida media de sustancias, puede ayudar en la estimación y la verificación de la hora a la que la víctima afirma haber perdido su la conciencia)
El uso de una sustancia que es desconocida para el laboratorio y / o que está más allá de su capacidad de análisis (por ejemplo nuevas "drogas de diseño" o sustancias que muestran alta potencia a bajas concentraciones)
Degradación durante el almacenamiento de algunos medicamentos (por ejemplo zopiclona y nuevos fármacos como methcathinones). Si no es posible analizar muestras dentro de 24 horas, la congelación de muestras (-18 ° C) tan pronto como sea posible es la mejor opción para evitar esta degradación

Cualquier medicamento o procedimiento utilizado en el tratamiento de la víctima deben ser considerados en la interpretación de resultados. La administración concomitante de un fármaco diurético, por ejemplo, puede resultar en la dilución de la orina causando la concentración del compuesto que se sospecha que ser por debajo de la MRPL antes de lo que sería el caso si se administra un solo compuesto. La administración concomitante de alcohol puede tener un profundo efecto sobre la farmacocinética y la farmacodinámica del fármaco administrado. Por lo tanto, los resultados deben ser revisados en el contexto de toda la investigación y el caso la historia.

Una identificación positiva en la orina normalmente es prueba suficiente de que la víctima fue expuesta a un fármaco en un plazo de uno a cinco días antes de que se recoja la muestra. Cabe señalar que el período de detección depende de la sustancia, así como la dosis que se administró.
La práctica de la correlación de la concentración urinaria en el momento de muestreo con la dosis y el efecto de la droga en el momento de la exposición no se recomienda.
Debido a la naturaleza endógena de GHB (ácido gamma-hidroxibutírico, gamma-hidroxibutirato), se debe tener cuidado en la interpretación de los resultados positivos. Concentraciones de GHB se ha demostrado que aumentan en muestras de orina in vitro durante el almacenamiento. Por lo tanto, la concentración real de corte recomendado para GHB endógeno en la orina es 10 mg / l para ayudar a distinguir endógena de GHB exógeno

Un resultado positivo en la sangre puede ser prueba de una exposición a un fármaco en un plazo de tiempo más corto en comparación con la orina (por lo general menos de 48 horas). La concentración sanguínea puede proporcionar información sobre el posible efecto farmacológico en el momento del supuesto hecho. La concentración de un fármaco en sangre, junto con la información farmacocinética puede ser usada para predecir y correlacionar los síntomas descritos por la víctima. Amnesia y / o pérdida del conocimiento anterógrada puede dar lugar a dificultades para estimar con precisión el momento del hecho.
Encontrar GHB en la sangre puede ayudar para la interpretación de los resultados obtenidos en la orina. Al igual que en la orina, las concentraciones de GHB se ha demostrado que aumentan en muestras de sangre in vitro durante el almacenamiento. Por lo tanto, los investigadores han sugerido que un punto de corte adecuado para GHB tan alta como 2 mg / l si se recoge la sangre asépticamente y se almacenó a + 4 ° C. Aciduria GHB es un raro trastorno genético (deficiencia de deshidrogenasa semialdehído succínico) en la que se incrementan los niveles de GHB endógenos en sangre y orina de sus pacientes.

Un resultado positivo en el cabello puede proporcionar la prueba de una exposición durante el periodo de crecimiento analizado. Análisis segmentario es importante proporcionar información sobre el período de tiempo apropiado durante el cual se produjo el presunto delito. Análisis de cabello segmentario puede proporcionar información sobre si la sustancia se toma con regularidad antes del supuesto incidente o si la sustancia se ha ingerido sólo en un corto plazo de tiempo que correspondía al momento del incidente. Es importante que los resultados de los análisis de cabello segmentario se consideren en el contexto de otras pruebas para apoyar el caso. La velocidad de crecimiento media de pelo de la cabeza 1.0 +/- 0.2 cm por mes es de uso general. Sin embargo, la velocidad de crecimiento de un poco de pelo podría ser tan bajo como 0,6 cm por mes o hasta 2 cm por mes.

Especial atención debe ser dada al análisis del cabello de GHB. Como el GHB es un compuesto endógeno, los niveles normales de GHB endógeno en cada individuo varían. El mechón de pelo tiene que ser cortado en 5 a 10 pequeños segmentos (0,3 a 0,5 cm de largo) y cada segmento analizado por GHB con el fin de identificar si un segmento tiene la concentración de GHB 10 veces más alto que los demás, lo que sugiere posible administración de
GHB exógena


BIOLOGIA FORENSE
Delitos sexuales y persistencia de semen
El asalto sexual es generalmente un crimen oculto donde los únicos testigos son la víctima y el agresor. Por una variedad de razones, incluso la víctima puede ser incapaz de proporcionar una explicación detallada del hecho o de la identidad del autor. A menudo, la historia clínica se basa en la palabra de una persona contra otra. Con esa información inicial limitada, la evidencia física y biológica obtenida de la víctima, de la escena del crimen, y del sospechoso jugará un papel fundamental en la reconstrucción objetiva y científica de los hechos en cuestión. La violación es un excelente ejemplo del Principio de Locard que establece: Cada contacto deja un rastro. Además de los pelos, fibras y residuos que puedan ser transferidas en otros tipos de delitos violentos, el violador a menudo deja una firma biológica personal que pueden incluir sangre, saliva, y lo más importante, el semen. Esta evidencia de semen es con frecuencia una piedra angular en la investigación penal.
En cualquier delito contra la integridad sexual, hay cuatro preguntas principales:
1. ocurrió contacto sexual? La recuperación positiva en la víctima de cualquiera de las partes componentes del semen, es generalmente considerado prueba concluyente de que el contacto sexual tuvo lugar. Recuperación de semen de la vagina, sin embargo, no prueba necesariamente el coito ya que otros modos de deposición pueden ser responsables.
2. Cuando (o en qué plazo) se produjo el contacto sexual? El intervalo entre la deposición del semen y la recopilación de pruebas se puede estimar mediante la comparación de los resultados específicos en el caso de las normas publicadas y los intervalos máximos informados de recuperación.
3. ¿Puede un sospechoso específico incluirse o excluirse como fuente potencial del semen? Perfiles genéticos a partir del material de prueba, la víctima y el sospechoso se pueden desarrollar utilizando serología convencional (antígenos y enzimas) y el ADN. Estos perfiles pueden ser comparados y un nivel de confianza establecido para incluir o excluir a un sospechoso específico.
4. ¿El contacto sexual consensual o no consensual? Si la víctima está más allá de la edad de consentimiento, los resultados de semen no son útiles. Si la víctima es menor de edad, entonces el consentimiento es discutible y la recuperación de esperma es consistente con la comisión del delito

El primer paso obvio en la búsqueda de evidencia de semen está entrevistando a la víctima. Los productos recogidos de la escena para el análisis forense pueden incluir ropa de la víctima llevaba durante o después del hecho, ropa de cama, las muestras de los muebles, vehículos, alfombras, o cualquier artículo que la víctima pudo haber utilizado para limpiar con después del asalto (tejido, paño, etc.) .
Muestreo guiado adicional en la víctima será obtenido en el curso del examen médico forense. Si no se ha conservado, la ropa del hecho, se pueden recoger el momento del examen. La prioridad más alta se dirige a los elementos que la víctima cree que contiene el semen, las áreas de manchas visibles, y cualquier artículo de la ropa que estaba más cerca de la zona genital. El examinador también obtiene muestras del cuerpo de la víctima. Una vez más, cualquier área de la víctima cree que estaba en contacto con el semen se limpiaran cuidadosamente. Cualquier material en el cabello de la víctima (púbico, la cabeza o el cuerpo) se recortará y retenido. Escaneo de la víctima con una fuente de luz ultravioleta puede revelar la fluorescencia de semen seco, que no era visible a la luz normal.
El examinador debe recoger muestras de cualquier cavidad corporal o abertura por donde se intentó o completó el contacto sexual. Por desgracia, las víctimas son bastante imprecisas en sus percepciones sobre la deposición del semen en o cerca de las cavidades del cuerpo. Las posibles explicaciones incluyen el estrés severo psicológica del hecho y la liberación escasa potencial, pero detectable, de cantidad de semen en la emisión de pre-eyaculación. El semen también se ha recuperado en los casos en que la víctima cree que el agresor llevaba un condón, por lo que las muestras deben ser obtenidas a pesar de la historia del uso del condón.
El proceso de recogida de muestras biológicas de la víctima por lo general consiste en la aplicación de hisopos humedecidos a las áreas de posibles manchas secas y la inserción de los hisopos secos (bajo visualización directa) en las cavidades del cuerpo para absorber cualquier secreción líquida. Algunos laboratorios prefieren muestras expectoradas líquidos de saliva para el muestreo en cavidad oral o aspiración vaginal (o lavado) después de la penetración vaginal.
La manipulación y envasado adecuado de potencial evidencia de semen no pueden ser tensión excesiva. Cualquier pruebas 'húmeda' 'húmedo' debe ser bien secada al aire. En el caso de los hisopos, esto requiere la colocación en una corriente de aire frío durante al menos 60 minutos. Evidencia biológica potencial debe envasarse en recipientes que permiten la circulación del aire; Nunca en bolsas de plástico selladas o no porosas, tubos, frascos o cajas. La Cadena de custodia debe ser meticulosamente documentada y se adhieren a las normas legales vigentes.
El material de evidencia presentado al laboratorio forense para el análisis de posible semen, suele consistir en frotis tomados de varios lugares en o en la víctima y objetos (ropa, tela, pelo enmarañado, etc.), que puede contener el semen. Cada laboratorio tiene su propio protocolo y secuencia específica para el análisis de la evidencia, pero el enfoque general es similar.

La detección de esperma en hisopos anales debe interpretarse con cautela. La recuperación de espermatozoides anal de una víctima de sodomía masculina o de una víctima de sodomía femenina sin espermatozoides vaginal detectable es consistente con el contacto sexual anal. Dificultad surge cuando la mujer víctima tiene tanto espermatozoides vaginal y anal. Drenaje de material vaginal puede contaminar la zona anal. Técnica de muestreo, el etiquetado específico de las concentraciones de esperma 'anal' y muestras '' rectales y todos llevan en la interpretación del caso individual.
Tiempos máximos de recuperación de espermatozoides reportados, recogidos de las cavidades del cuerpo de las víctimas de agresión sexual

Vagina
Cérvix
Boca
Recto
Ano
Espermatozoides móviles
6-28 h
3-7.5 días
—
—
—
Espermatozoides móviles
14 h a 10 días
7.5-19 días
2-31 h
4-113h
2-44h

La recuperación de los espermatozoides desde, en alrededor de la boca es generalmente baja. Algunas autoridades ahora abogan por muestreo oral mediante la saliva líquida expectorado para mejorar el rendimiento sobre la técnica de hisopo estándar


Pruebas de detección

Luz ultravioleta, para ayudar a identificar las manchas de semen ocultas, la evidencia puede ser escaneada con una luz ultravioleta (o fuente de luz alternativa). Semen seco puede fluorescer bajo iluminación UV y resaltar las manchas que antes eran invisibles dirigiendo así el criminalista de probar las zonas de mayor potencial de rendimiento

Pruebas químicas presuntivas para Sustancias semen dentro de los hisopos en la evidencia o manchas que permitan la identificación y / o la individualización de semen debe ser solubilizados y se extrajeron para su análisis. Prueba presuntiva para el semen ayuda a confirmar el lugar de muestreo como un sitio potencialmente positivo. Dos pruebas presuntivas de uso común para el semen son colorimétricas. La prueba de Fluorescia identifica la presencia de colina y la prueba Brentamine detecta la fosfatasa ácida. Ambos de estos ensayos son cualitativos


Las pruebas confirmatorias espermatozoides móviles no móviles
Proteinasa K de fluorescencia mejora la hibridación in situ (FISH) marcadores de semen no celular fosfatasa ácida p30
Individualización de las pruebas de semen Grupo sanguíneo tipificación ABO sistema (H)
Lewis antígenos Enzima tipificación
Fosfoglucomutasa (PGM)
Peptidasa de ADN (Pep A)

Las pruebas confirmatorias para el semen implican la solubilización de material evidencia, seguida por agitación y centrifugación apropiada, que produce un sobrenadante y un sedimento celular. El sedimento de células se utiliza principalmente para detectar espermatozoides y para el análisis de ADN. La porción sobrenadante es más útil para detectar marcadores no celulares en el semen cuando el esperma no se detecta y desarrollar perfiles genéticos o agrupación.
La identificación de uno o más espermatozoides intactos es una prueba concluyente de la presencia de semen y por lo tanto afirma contacto sexual. El sitio de la condición y la recogida de los espermatozoides puede ser muy útil para definir el intervalo de tiempo entre la deposición y la recogida (también conocido como el intervalo postcoital).


La Hibridación in situ fluorescente, un nuevo método de análisis de citogenética molecular ofrece un enfoque innovador para mejorar la identificación de células masculinas de materiales en la evidencia de delitos contra la integridad sexual. La fluorescencia de hibridación in situ (FISH) utiliza una sonda de ADN específica del cromosoma Y para identificar células Y-cojinete (masculinos). Esta técnica sensible identifica no sólo los espermatozoides, también células no espermáticas (neutrófilos epiteliales y segmentados) de origen masculino. Aunque la experiencia forense con esta técnica en casos de agresión sexual se limita, ofrece una alternativa sensible y específica a los métodos convencionales para la detección primaria o confirmación de los espermatozoides. También ofrece el potencial adicional para confirmar el contacto hombre-mujer cuando los marcadores de esperma y semen están ausentes.

La Fosfatasa ácida fosfatasa ácida no es una sola enzima, es una gran variedad de isoenzimas relacionadas de una variedad de fuentes. El interés forense en la fosfatasa ácida en la evaluación de las pruebas contra la integridad sexual se basa en el hecho de que la actividad de la fosfatasa ácida en el semen humano es 500-1000 veces mayor que en cualquier otro líquido corporal normal. Desafortunadamente, el uso de la fosfatasa ácida como un marcador para el semen se ve comprometida porque la vagina es también una fuente del mismo tipo de la fosfatasa ácida. La fosfatasa ácida seminal y vaginal no se pueden discriminarse de manera fiable cualitativamente, el único enfoque para diferenciar el semen azoospérmicos de las secreciones vaginales es mediante el análisis cuantitativo. Encontrar un nivel de fosfatasa ácida 'significativamente' elevado es consistente con la presencia de semen.


Muy poco se ha publicado sobre la recuperación post-mortem de semen de las víctimas de violación y homicidio. Un informe encontró espermatozoides morfológicamente intacta en la vagina de una víctima de violación-homicidio que había estado muerto 16 días. Un informe más reciente describe la recuperación de espermatozoides intactos de la vagina de una víctima de homicidio en 34 días post mortem. Esta víctima también tenía p30 detectable en la muestra vaginal. No hubo información disponible en cualquier informe que el intervalo de tiempo entre la deposición del semen y la muerte.


Cuando la historia anticipa la recuperación de semen de una víctima de violación, pero la evaluación forense no puede encontrar ninguna evidencia de semen, hay una serie de posibles explicaciones, además de la sugerencia obvia de una falsa denuncia, puede existir disfunción sexual, el uso del condón, eliminación mecánica (drenaje, las actividades de higiene), o eliminación biológica (degradación).



La glicoproteína p30, p30 (también conocido como antígeno prostático específico o PSA), se deriva de células epiteliales de la próstata y se encuentra en plasma seminal, orina masculino, y la sangre. P30 no se ha encontrado en ningun tejido del cuerpo femenino o fluido. No hay diferencias significativas en la recuperación de p30 de los hombres vasectomizados comparado con los controles no vasectomizados. El hallazgo de cualquier material de p30 en muestras recogidas confirma la presencia de semen. Un análisis de p30 positivo identifica de forma fiable semen independientemente de si la fosfatasa ácida se eleva o espermatozoides se detectan.
Como con otros marcadores, el nivel de p30 disminuye después de la deposición en la vagina. La desaparición es lineal y bastante predecible. El tiempo medio para alcanzar los límites inferiores de detección vaginal es de 27h con un rango de 13 a 47 h, por lo tanto p30 proporciona un punto de referencia con el que para estimar el intervalo post-coital adicional. P30 es muy durable en manchas secas y se ha detectado hasta 10 años más tarde en el material almacenado a temperatura ambiente

Los factores que pueden limitar la detección o la recuperación de semen de la víctima de un delito contra la integridad sexual:
Disfunción sexual o uso de condón por el agresor
Intervalo de tiempo entre el hecho y el examen:
Drenaje de contenidos vaginales
Degradación de las secreciones seminales
La dilución de los componentes endógenos por higiene de la Víctima (duchas, bañarse, hacer gárgaras, etc.) la actividad fisiológica (orinar, defecar, menstruación)
Espermatogénesis alterada: deficiencias hormonales Germinal aplasia / hipoplasia (hipófisis, tiroides, gónadas) Drogas de irradiación testicular / toxinas Neoplasia Varicocele
Infección (paperas, tuberculosis, gonorrea)
La temperatura escrotal elevada
Alcoholismo crónico
Eyaculación frecuente puede crear transitoria azoospermia)
Deterioro de la entrega
Vasectomía
Trauma
Anomalías congénitas


La documentación de las lesiones y la recogida de pruebas se han mejorado mediante la realización de un examen médico forense lo antes posible tras el hecho. Las recomendaciones para toma de muestras posterior a un hecho de agresión sexual oscilan de 72-120 horas después de cometido el delito. La mejor evidencia biológica se recoge dentro de las primeras 12 horas y por lo tanto a partir de las 72 horas las pruebas pueden tender a desaparecer.
Sin embargo, dependiendo de múltiples factores, exámenes hasta 120 horas todavía pueden dar buenos resultados. Reconocer que las decisiones sobre si se debe recopilar pruebas en un caso son guiados por el conocimiento de que los límites de tiempo varían debido a múltiples factores. Estos pueden incluir la ubicación de las pruebas, si la víctima ha bañado, tipo de muestra recogida y adicionales factores.
La colección de la mayoría de las pruebas forenses en el cuerpo de la víctima utiliza algodón con hisopos de punta. Directrices para el uso de los hisopos con punta de algodón incluyen:
1) Siempre recoger hisopos 2 al mismo tiempo.
2) Si el área está seca, humedezca ligeramente con los aplicadores ya sea con agua estéril, agua del grifo o solución salina normal.
3) Después de recoger los hisopos, permita que se sequen al aire (no goteo) antes de colocarlos en papel o cajas individuales.
4) Utilice hisopos separados para cada ubicación cuerpo del cual se toma una muestra (es decir, el cuello, pecho, abdomen, etc).
5) Etiquetar el paquete con el nombre del paciente y la localización del material recogido.

El examinador debe siempre usar guantes durante el examen y la recopilación de muestras. Evite el examinador contaminar el kit de insumos o las muestras al hablar, toser o estornudar.
La historia clínica se recoge después de obtener el consentimiento informado. Las personas presentes en la sala de examen debe limitarse al observar, y con el consentimiento de la víctima.
Si el paciente no recuerda detalles de la agresión, las mejores prácticas dicta la recogida de muestras de los tres orificios (boca, vagina, ano). Ejemplares adicionales en las muestras pueden ser obtenidas basándose en el examen físico

La justificación de un examen con espéculo se debe discutir con el paciente en relación con el consentimiento. Sin embargo, es la elección de la víctima para proceder a menos que esté médicamente indicado por factores como la obvia lesión / sangrado. Hisopados vaginales todavía se pueden recoger en la víctima.
La colección de hisopos de piel perineal a menudo da pruebas y si está indicado, debe obtenerse antes del examen vaginal. Humedezca ligeramente dos (2) aplicadores de algodón y rodar suavemente sobre el perineo. Después de secar al aire, coloque hisopos en la etiqueta apropiada de papel de la manga / caja
Para recoger las muestras vaginales, inserte dos aplicadores (2) con punta de algodón en el fondo de saco vaginal.
Muestras adicionales se pueden obtener de las paredes del cuello uterino y vaginal detrás del cuello uterino. Estos son especialmente buenas zonas de hisopo, si la cantidad de tiempo transcurrido desde que el hecho es largo o la víctima se ha duchado.
Deje secar al aire los hisopos antes de colocar en el papel de la manga / caja. Cuando se obtiene más de una muestra de la vagina, etiquetar los especímenes con el fin de obtención junto con la fuente de la muestra. Por ejemplo: # 1 peri-vaginales perineo, # 2 cérvix, # 3 paredes vaginales.