EMBRIO TRANSFER

18

TUGAS TERSTRUKTUR TEKNOLOGI REPRODUKSI
MEKANISME TRANSFER EMBRIO
Dosen Pengampu :






Oleh:

Nur Chairatun Hisanun 125050100111063
Kelas B



FAKULTAS PETERNAKAN
UNIVERSITAS BRAWIJAYA
MALANG
2015



BAB I

PENDAHULUAN

Latar Belakang
 Populasi sapi potong di Indonesia sekitar 13,4 juta ekor (DITJEN BP PETERNAKAN, 2003), yang sebagian besar berupa usaha peternakan rakyat yang dikelola secara tradisional dan relatif sedikit menggunakan inovasi teknologi. Jumlah sapi yang minim tersebut jika dibandingkan dengan jumlah penduduk Indonesia, sangat berbanding terbalik. Sehingga dibutuhkan upaya pengembangan sapi potong di Indonesia.
Pemerintah Indonesia sendiri telah melakukan beberapa upaya dalam perbaikan mutu sapi potong diantaranya dengan meningkatkan kualitas genetik. Akan tetapi hal ini menemui beberapa kendala, diantaranya seleksi atau upaya perbaikan mutu gentik untuk mendapatkan breed baru yang unggul memerlukan waktu yang sangat lama, mahal, dan hasilnya kadang-kadang tidak memuaskan.
Pada negara yang sudah maju perbaikan mutu genetik biasanya dilakukan dengan memanfaatkan berbagai metode dan cara yang sangat canggih, seperti manipulasi embrio (MOET, IVF, splitting embryo, cloning, sexing sperma/embrio dan lain-lain), maupun penggunaan metode seleksi dengan cara best linier unbiased prediction (BLUP) ataupun memanfaatkan teknologi penciri DNA (quntitative trait loci/QTL) (DIWYANTO et al., 2000)
Dan di Indonesia sendiri aplikasi Transfer Embrio juga mulai dikembangkan. Menurut literatur Teknologi fertilisasi in vitro (IVF) saat ini masih dilakukan dengan memanfaatkan oosit segar, namun kendala yang dihadapi adalah oosit mamalia memiliki daya tahan hidup yang sangat terbatas sehingga tidak dapat disimpan dalam waktu yang lama pada suhu kamar (Vieira et al., 2002). Produksi embrio dapat dilakukan secara in vivo maupun in vitro.
Keberhasilan teknologi Transfer Embrio dengan menggunakan embrio baik secara in vivo maupun in vitro ditunjukkan dengan keberhasilan menghasilkan anak yang dilahirkan dengan kualitas yang di inginkan. Transfer Embrio dilakukan dengan beberapa tahap yaitu dengan evaluasi embrio dan klasifikasi dari embrio, maturasi atau pematangan embrio dan beberapa tahapan lainnya.

Tujuan Penulisan
Tujuan penulisan makalah bagi penulis maupun pembaca adalah untuk menambah informasi dan wawasan mengenai perbaikan mutu genetik salah satunya melalui Transfer Embrio. Perbaikan mutu genetik dapat dilakukan dengan beberapa cara akan tetapi kini Transfer Embrio mulai banyak dikembangkan. Paper ini menjelaskan mengenai pengertian Transfer Embrio, tahapan-tahapan Transfer Embrio dan manfaat Transfer Embrio itu sendiri.





















BAB II

PEMBAHASAN

Transfer Embrio

Teknologi fertilisasi in vitro (IVF) saat ini masih dilakukan dengan memanfaatkan oosit segar, namun kendala yang dihadapi adalah oosit mamalia memiliki daya tahan hidup yang sangat terbatas sehingga tidak dapat disimpan dalam waktu yang lama pada suhu kamar (Vieira et al., 2002).
Keterbatasan waktu simpan ini dapat diatasi dengan teknik penyimpanan beku atau kriopreservasi oosit untuk mempertahankan kelangsungan hidup sel sehingga viabilitas oosit dapat dipertahankan dengan cara mereduksi fungsi dan aktivitas metabolik tanpa terjadinya kerusakan membran maupun Teknologi rekayasa reproduksi khususnya kriopreservasi telah cukup banyak dikembangkan untuk spermatozoa dan embrio, namun sejauh ini keberhasilan kriopreservasin oosit yang telah dilaporkan masih sangat terbatas dan variatif. Keberhasilan kriopreservasi oosit akan memungkinkan tersedianya oosit beku sehingga mempermudah pengaturan waktu di dalam produksi embrio in vitro dan secara umum merupakan upaya penyimpanan dan pemeliharaan plasma nutfah. Selain itu, keberhasilan kriopreservasi oosit akan memperbaiki teknik penyediaan embrio sehingga oosit segar tidak diperlukan lagi.
Penggunaan prosedur kriopreservasi oosit secara komersial masih sangat terbatas salah satu tantangan adalah membuat metode kriopreservasi oosit yang menjamin viabilitas tinggi. Terdapat dua metode kriopreservasi yaitu metode konvensional dan vitrifikasi. Kedua metode ini mempunyai kelebihan dan kekurangan. Pada awal studi tentang kriopreservasi, dilakukan kriopreservasi menggunakan metode konvensional, namun saat ini metode vitrifikasi lebih sering diaplikasikan. Kelebihan dari metode vitrifikasi adalah pemadatan cairan tanpa melalui pembentukan kristal es (Shaw et al., 2000). Metode tersebut sederhana, murah, dan tidak memerlukan alat khusus untuk menurunkan suhu secara bertahap sehingga mudah diaplikasikan ditempat yang memiliki kontainer nitrogen cair.
Selama proses kriopreservasi diperlukan suatu krioprotektan. Krioprotektan selain dapat melindungi sel juga ternyata diduga dapat menimbulkan kerusakan pada sel akibat pengaruh toksisitasnya. Derajat proteksi dari bahan krioprotektan terhadap proses kristalisasi pada masa pembekuan tergantung dari jenis dan konsentrasi krioprotektan yang dipakai serta lama paparan (Kasai, 2002). Dari beberapa penelitian tentang kriopreservasi oosit, diketahui ada bermacam-macam krioprotektan yang dapat dipergunakan untuk vitrifikasi oosit, namun demikian telah diketahui bahwa etilen glikol (EG) mempunyai efek toksik yang lebih rendah dibandingkan krioprotektan yang lain (Gordon, 1994; Hochi et al., 1996). Hasil penelitian Wani et al. (2004) menunjukkan bahwa tingkat fertilisasi in vitro oosit setelah proses vitrifikasi menggunakan DMSO sebesar 12,3%. Tingkat fertilisasi oosit menggunakan EG belum pernah dilaporkan. Oleh karena itu, penelitian ini bertujuan adalah mengkaji pengaruh konsentrasi EG dan lama paparan terhadap tingkat oosit terfertilisasi.

Tujuan Transfer Embrio
Tujuan Transfer Embrio sendiri yaitu untuk meningkatkan genetik pada keuturunan, memperbanyak keturunan induk yang unggul, meningkatkan potensi genetic waktu yang singkat, meningkatkan produksi susu, meningkatkan bibit unggul untuk disebarkan dan menyelamatkan genetik superior sapi atau organisme.

Metode dan Tahapan Transfer Embrio
Teknologi transfer embrio merupakan aplikasi bioteknologi reproduksi ternak melalui teknik Multiple Ovulation Embrio Transfer (MOET) serta rekayasa genetic untuk meningkatkan mutu genetik dalam waktu yang lebih singkat dan jumlah yang lebih banyak. Teknik produksi embrio dapat dilaksanakan dengan beberapa cara seperti cara konvensional atau invivo dan metode invitro serta Oocyt Pick Up (OPU). Produksi embrio dengan cara invivo ialah salah satu teknik produksi embrio dimana pembentukan embrio berlangsung di dalam alat reproduki betina sedangkan metode invitro adalah sebaliknya yaitu proses pembentukan embrionya berlangsung di luar alat reproduksi. Dan untuk pengembangan dan peningkatan produksi dalam rangka penekanan biaya produksi dapat diterapkan teknik kloning Embrio. Embrio yang digunakan untuk transfer embrio dapat berupa embrio segar atau embrio beku (freezing embrio).
Embrio beku efisien untuk dipakai karena dapat disimpan lama sebagai stock dan dapat dibawa ke daerah-daerah yang membutuhkan.Sedangkan embrio segar hanya dapat di transfer pada saat produksi dilokasi yang berdekatan dengan donor. Peningkatan mutu genetik dengan ketersediaan anak keturunan yang banyak maka diarahkan kepada : 1. Transfer Embrio Jenis Sapi Potong. Untuk menghasilkan bibit yang akan menghasilkan bibit dasar dengan pertambahan bobot badan > 1,5 kg/hari dan mencapai berat > 400 kg pada umur 1,5 tahun. Yang telah di produksi antara lain Simenthal, Limousin, Brangus, Brahman, Angus dan Crossing Simenthal dan Brahman 2. Transfer Embrio Sapi Perah. Untuk menghasilkan bibit dasar (Fondation stock) dengan kriteria dari induk produksi susu > 7000 kg laktasi dan untuk pejantan mewariskan produksi susu > 10.000 kg laktasi. Bangsa yang telah di produksi adalah FH. Berikut merupakan penjelasan dari masing-masing proses transfer embrio :

1. Pengadaan Sapi Donor dan Sapi Resipien
Seleksi dilakukan dengan tujuan agar hewan yang dijadikan sebagai donor maupun resipien merupakan hewan yang layak mendapat perlakuan terhadap teknologi transfer embrio. Calon donor yang akan dipakai harus diseleksi dengan kriteria sbb:
Memiliki genetik yang unggul (Genetik Superiority)
Mempunyai kemampuan reproduksi yang tinggi (High Reproductivity) sehat secara serologis bebas dari penyakit hewan menular terutama penyakit-penyakit reproduksi
Memiliki nilai pasar tinggi.
Sejarah reproduksi diketahui, mempunyai siklus birahi normal dan
kemampuan fertilitas tinggi
Pada calon resipient diberikan persyaratan berikut :
Minimal sudah beranak atau dara yang mempunyai performans yang baik mempunyai berat badan minimal 300 kg
Bebas penyakit menular terutama penyakit reproduksi.
Sejarah reproduksi tidak menunjukkan gejala infertil, mempunyai siklus normal, tanda birahi terlihat jelas, intensitas lendir birahi normal dan transparan dan mempunyai interval birahi antara l8 -24 hari.
Sapi resipien tidak harus mempunyai mutu genetik yang baik dan berasal dari bangsa yang sama, tetapi harus mempunyai organ dan siklus reproduksi normal, tidak pernah mengalami kesulitan melahirkan (distokia).

2. Super Ovulasi
Sapi merupakan ternak uniparous, dimana sel telur yang terovulasi setiap siklus berahi biasanya hanya satu buah. Dalam program TE, untuk merangsang terjadinya ovulasi ganda, maka diberikan hormon superovulasi sehingga diperoleh ovulasi sel telur dalam jumlah besar. Hormon yang banyak digunakan untuk rekayasa superovulasi adalah hormon gonadotropin seperti Pregnant Mare's Serum
Gonadotripin (PMSG) dan Follicle Stimulating Hormone (FSH). Penyuntikan hormon gonadotropin akan meningkatkan perkembangan folikel pada ovarium (folikulogenesis) dan pematangan folikel sehingga diperoleh ovulasi sel telur yang lebih banyak. Hormon FSH mempunyai waktu paruh hidup dalam induk sapi antara 2-5 jam. Pemberian FSH dilakukan sehari dua kali yaitu pada pagi dan sore hari selama 4 hari dengan dosis 28 – 50 mg (tergantung berat badan). Perlakuan superovulasi dilakukan pada hari ke sembilan sampai hari ke 14 setelah berahi.

3. Penyerentakan Berahi
Penyerentakan berahi atau sinkronisasi estrus adalah usaha yang bertujuan untuk mensinkronkan kondisi reproduksi ternak sapi donor dan resipien. Sinkronisasi estrus umumnya menggunakan hormon prostaglandin F2a (PGF2a ) atau kombinasi hormon progesteron dengan PGF2a .

Prosedur yang digunakan adalah:
Ternak yang diketahui mempunyai corpus luteum (CL), dilakukan penyuntikan PGF2a satu kali. Berahi biasanya timbul 48 sampai 96 jam setelah penyuntikan.
Apabila tanpa memperhatikan ada tidaknya CL, penyuntikan PGF2a dilakukan dua kali selang waktu 11-12 hari. Penyuntikan PGF2a pada ternak resipien harus dilakukan satu hari lebih awal daripada donor. Keadaan ini disebabkan karena pada ternak donor yang telah diberi hormon gonadotropin, berahi biasanya lebih cepat yaitu 36 – 60 jam setelah penyuntikan PGF2a, sedangkan pada resipien berahi biasanya timbul 48 – 96 jam setelah penyuntikan PGF2a

4. Inseminasi Buatan
IB yang baik dilaksanakan 6 sampai 24 jam setelah timbulnya berahi. Berahi pada sapi ditandai oleh alat kelamin luar (vagina) berwarna merah, bengkak dan keluarnya lendir jernih serta tingkah laku sapi yang menaiki sapi lain atau diam apabila dinaiki sapi lain. Pada program TE, IB dilakukan dengan dosis ganda dimana satu straw semen beku biasanya mengandung 30 juta spermatozoa unggul.

5. Koleksi Embrio
Koleksi embrio pada sapi donor dilakukan pada hari ke 7 sampai 8 setelah berahi. Sebelum dilakukan panen embrio, bagian vulva dan vagina dibersihkan dan disterilkan dengan menggunakan kapas yang mengandung alkohol 70%. Koleksi embrio dilakukan dengan menggunakan foley kateter dua jalur 16-20G steril (tergantung ukuran serviks). Pembilasan dilakukan dengan memasukkan medium flushing Modified Dulbecco Phosphate Buffered Saline (M-PBS) yang telah dihangatkan di dalam waterbath 37°C. Embrio yang didapat dari pembilasan bisa langsung di transfer ke dalam sapi resipien atau dibekukan untuk disimpan dan di transfer pada waktu lain.


6. Transfer Embrio
Terdapat dua metode TE yang digunakan yaitu metode pembedahan dan metode tanpa pembedahan. Metode pembedahan dilakukan dengan jalan membuatan sayatan di daerah perut (laparotomi) baik sayatan sisi (flank incici) atau sayatan pada garis tengah perut (midle incici). Metode tanpa pembedahan dilakukan dengan memasukkan embrio kedalam straw kemudian ditransfer kedalam uterus resipien dengan menggunakan cassoue gun insemination. Tiga faktor penting yang harus diperhatikan guna keberhasilan pelaksanaan transfer embrio adalah :
Kualitas embrio yang akan di transfer; umur,kwalitas, jenis embrio (bela/segar) metode pembekuan adanyakontaminasi atau infeksi pada embrio.
Tingkat keterampilan petugas dalam mentranfer antara lain kemampuan mendeposisikan embrio secara tepat (sepertiga apexcornua uteri) dan cepat, tidak terjadi luka pada uterus, dan sapi tenang/tidak stres.
Respon sapi resipien terhadap sinkronisasi, kondisi pakan yang digunakan, kondisi tubuh dengan BCS (Body Condition Skor) sedang (2,8-3,5) tidak ditemukan peradangan, kondisi ovarium dan CL normal dan penjagaan sapi jangan sampai stress

Koleksi Oosit
Ovarium dikumpulkan dari Rumah Potong Hewan dalam keadaan segar dan dimasukkan dalam medium berisi NaCl 0,9% + Penisilin (Meiji) 100 IU + Streptomisin (Meiji) 100 IU pada suhu 35 °C. Dalam waktu tidak lebih dari 3 jam maka dilakukan koleksi oosit dengan metode aspirasi. Medium aspirasi yang digunakan TCM 199 powder (GIBCO, St. Louis, MO, USA) ditambahkan Hepes (Sigma, Grand Island, NY, USA) dan NaHCO3 (Sigma Grand Island, NY, USA). Media ini difiltrasi dengan menggunakan membran filter berukuran diameter 0,22 μm. Medium aspirasi mengambil sampel. Aspirasi dilakukan dengan menggunakan jarum 18 G. Evaluasi kualitas oosit immature dilakukan berdasarkan kriteria Hozumi (2001). Oosit kualitas A (sitoplasma kompak secara sempurna dengan sel-sel kumulus beraturan menempel di keseluruhan bagian oosit) digunakan dalam penelitian ini.

Maturasi Oosit In Vitro
Setelah dilakukan klasifikasi kualitas oosit, maka oosit yang berkualitas A dimaturasi secara in vitro dengan medium TCM199 + FCS (Gibco St. Louis, MO, USA) 10% + PMSG (Intervet, Holland) 10 IU + HCG (Intervet, Holland) 10 IU. Untuk mengetahui tahap pematangan, oosit dikultur selama 24 jam dalam inkubator pada suhu 39 °C dan 5% CO , 2 kelembaban 95%. Setelah proses maturasi in vitro oosit dievaluasi menggunakan mikroskop inversi dengan pembesaran 400x. Oosit dengan sel kumulus terekspansi sempurna digunakan dalam penelitian ini.

Vitrifikasi Oosit
Oosit hasi maturasi in vitro selama 24 jam didehidrasi pada larutan sukrosa (Sigma, St. Louis, MO, USA) 0,25 M, dan 0,50 M, masing-masing selama 5 menit, kemudian dipaparkan ke dalam larutan vitrifikasi yang berbeda (EG 10, 20, 30, 40, dan 50%) ditambah 0,5 M sukrosa dengan lama waktu paparan yang berbeda (1, 3, dan 5 menit). Oosit dimasukkan ke dalam ministraw transparan 0,25 cc (French straw), masing-masing berisi 10 oosit. Setelah pemaparan di dalam uap nitrogen selama 10 detik, ministraw yang berisi oosit dimasukkan dalam kontainer nitrogen cair dan disimpan selama 2 minggu untuk pemeriksaan lebih lanjut.

Thawing Oosit
Thawing dilakukan dengan cara penghangatan (warming) di udara selama 10 detik kemudian dimasukkan dalam penangas air suhu 35 °C selama 1 menit. Isi ministraw dituangkan ke dalam cawan petri dan oosit dibilas dua kali dengan sukrosa 0,5 M untuk menghilangkan krioprotektan.

Fertilisasi In Vitro Oosit Setelah Vitrifikasi
Oosit segar dan oosit hasil vitrifikasi digunakan lebih lanjut untuk proses IVF. Pengamatan jumlah oosit yang terfertilisasi dilakukan dilakukan dengan pewarnaan aseto orcein 1% (Yamada et al., 2007). Pada penelitian ini diamati oosit yang terfertilisasi normal, oosit yang mengalami polispermia, dan oosit yang tidak terfertilisasi. Walaupun oosit yang telah mengalami vitrifikasi masih memiliki kemampuan untuk mendukung proses fertilisasi, namun keadaan poliploid menunjukkan persentase yang cukup tinggi jika dibandingkan dengan oosit tanpa perlakuan vitrifikasi. Penelitian Hochi et al. (1996) menunjukkan bahwa tingkat fertilisasi in vitro oosit sapi dalam larutan EG 40% menunjukkan tingkat poliploid yang cukup tinggi yaitu 44,9%. Hasil penelitian menunjukkan bahwa proses vitrifikasi mengakibatkan perubahan beberapa struktur oosit seperti zona pelusida, membran plasma dan butir-butir korteks yang berperan di dalam proses pencegahan polispermi seperti yang telah dilaporkan Hochi et al. (1996) dan Pedro et al. (2005).
Terdapat dua metode utama dalam transfer embrio yaitu metode operasi dan non operasi. Penggunaan metode operasi menghasilkan tingkat kebuntingan yang tinggi namun tingkat kebuntingan dengan metode non operasi juga dapat menyamai metode operasi jika teknisi mempunyai keahlian yang tinggi dalam transfer embrio.
a. Faktor yang mempengaruhi keberhasilan Transfer embrio
Kualitas Embrio.
Medium Transfer.
Sinkronisasi estrus donor dengan resipien.
Infeksi.
Penempatan embrio dalam uterus.
Metode non operasi dan teknisi.
Resipien, dara atau induk.
Status nutrisi resipien.
b. Seleksi Resipien
Resipien yang adalah masih muda dan terbebas dari penyakit dengan tingkat fertilitas yang tinggi dan mempunyai sifat keibuanyang baik juga, mempunyai pertumbuhan yang baik dan mudah dalam melahirkan anak.. bangsa ternak tidak terlalu menjadi permasalahan,umumnya jenis persilangan menunjukan tingkat fertilitas yang cukup baik.

c. Manajemen kesehatan resipien
Kesehatan dan kodisi reproduksi resipien harus di uji pada saat seleksi.deteksi yang dilakukan terutama terhadap abnormalitas saluran reproduksi, kondisi kebuntingan dan kesehatan ternak. Bila calon resipien didatangkan dari luar, maka harus dikarantina sebelum digunakan sebagai resipien. Selama periode ini, resipien harus diamati setiap hari terhadap tanda-tanda penyakit, peningkatan suhu tubuh dan infeksi yang mempunyai korelasi yang tinggi terhadap fertilitas.

d. Sikronisasi dan Deteksi Estrus
Deteksi Estrus
Keberhasilan Transfer embrio juga tergantung dari sinkronisasi estrus antara donor dan resipien. Donor dan resipien harus mempunyai panjang siklus estrus yang normal. Tingkat keberhasilan akan lebih tinggi jika perbedaan estrus resipien dan donor maksimal 1 hari. Standing heat adalah indikasi sapi estrus ditandai sapi akan diam jika dinaiki sapi lain. Walaupun pengamatan secara langsung dengan mata adalah metode deteksi estrus yang terbaik, namun saat ini terdapat peralatan yang dapat membantu deteksi estrus seperti heat mount detector atau paint stick.
Ciri lain yang menandakan estrus adalah:
Turunnya selera makan
Penurunan produksi susu secara tajam
Perubahan tingkah laku, gelisah
Keluarnya lender bening dari vagina
Sinkronisasi Estrus Resipien
Cara yang paling umum dilakukkan untuk sinkronisasi estrus adalah dengan injeksi PGF2α atau analognya (estrumate). Jika resipien yang telah disinkronisasikan mempunyai CL yang baik pada saat transfer embrio, maka tingkat kebuntingan yang diperoleh akkan sama dengan resipien yang estrus alami.
Metode Injeksi PGF2α
Injeksi tunggal PGF2α dengan palpasi rectal
Resipien yang berada pada pertengahan siklus estrus dan menunjukan CL pada ovarium akan berespon baik terhadap PGF2α pertama kali resipien diseleksi dengan palpasi rectal. Resipien yang memiliki CL dikelompokan ke dalam satu kelompok dan diinjeksikan dengan PGF2α (15-25 mg) atau estrumate (500 mg). Estrus akan muncul 48-96 jam kemudian.

2. Injeksi ganda PGF2α tanpa palpasi rectal
Seluruh resipien diinjeksi dengan PGF2α tanpa memperhatikan keberadaan CL pada ovarium. Ulangi injeksi PGF2α 11 hari kemudian. Estrus akan muncul 48-96 jam kemudian.
Resipien yang tidak respon terhadap injeksi PGF2α yang pertama akan berada pada posisi pertengahan siklus pada injeksi yang ke dua dan kembali akan menunjukan gejalah estrus. Resipien yang tidak respon terhadap injeksi PGF2α ke dua karena pada saat itu mereka berada pada posisi pertengahan siklus estrus.
Dengan metode ini seluruh resipien akan mengalami estrus. Resipien harus diinjeksikan dengan PGF2α satu hari lebih cepat dari pada donor, karena pengaruh perlakuan superovulai pada donor dengan hormone gonadotropin menyebabkan sebagian besar donor akan menjadi estrus 36-60 jam setelah injeksi PGF2α.

Persiapan dan prosedur Transfer
a. Material
Peralatan :
Transfer gun
Plastic sheath
Outer sheath
Gunting
Plastic straw
Straw cutter
Disposable syringe (5-10 ml) dengan jarum suntik
Cervix expander
Obat :
Kapas dicelupan ke dalam ethyl alcohol 70%
Kertas tisu dibasahi dengan densifektan (benzalkonium chloride
Xylocaine 2% (lidocaine HCL)
Padrine (prifinum bromide :anticonvulsivant)
b. Pemasukan embrio ke dalam straw
Persiapan straw :
Straw dicuci dengan air murni tanpa membasahi sumbat kapas, keringkan dan sterilisasi dengan gas ethylene oxide atau dengan cahaya ultra viole. Sterilisasi dengan gas ethylene harus sudah dilakukan 2 minggu sebelum straw digunakan, karena residu gas tersebut dapat memberikan pengaruh yang merusak terhadap embrio.
Straw dipotong 1-2 cm untuk menyesuaikan dengan transfer gun.
Straw dicuci beberapa kali dengan medium tanpa membasahi sumbat kapas.
Masukan medium (M-PBS) sehingga mengisi straw lebih kurang 2-3 cm.
Diikuti dengan pemasukan udara sepanjang lebih kurang 0.5 cm dari straw.
Kemudian medium yang mengandung embrio dimasukan ke dalam straw dengan syringe tuberculin 1 ml mendekati sumbat kapas, diikutii denga udara dan medium berikutnya. Medium terakhir akan membasahi sumbat kapas yang berada pada unjung straw.
c. Persiapan transfer gun
Straw yang telah berisi embrio ditempatkan dalam transfer gun dan ditutup dengan outher sheath. Hindarkan dari kontaminasi.
Jika resipien berada berdekatan dengan lab transfer embrio cara di atas dapat dilakukan secara langsung. Tetapi apabila lokasi resipien berjauhan dengan lab, maka straw harus ditutupi dan dibawah dengan hati-hati, dan dijaga agar tetap berada pada posisi horizontal.
d. Persiapan resipien
Pemeriksaan resipien untuk terakhir kalinya dilakukan 1 hari atau beberapa saat menjelang transfer. Jika pemeriksaan dilakukan dengan palpasi rectal, maka jangan meyentuh atau meraba bagian ovarium dan uterus secara kasar.
Kendalikan resipien di dalam kandang jepit dan keluarkan seluruh feses yang berada dalam rectum.
Lakukan epidural anastesi dengan 3 ml xylocaine.
Bagian vulva dan rectal dicuci dengan air hangat dan diusap dengan kertas tisu yang dicelupkan dengan desinfektan dan terakhir dengan kapas beralkohol.
e. Sinkronisasi antara tahap perkembangan embrio dengan siklus estrus resipien
Jika tahap perkembangan embrio dan siklus estrus resipien berbeda, maka harus disinkronkan sebaik mungkin. Sebagi contoh, pada hari ke 7 pembilasan transfer embrio segar dapat dilakukan. Jika hari ke 6-8 tersedia resipien, maka tahap morula dan blastosis awal ditransfer pada hari ke 6, tahap kompak morula dan blastosis awal ditransfer hari ke 7 dan expanded blastosis ditransfer hari ke 7 dan expanded blastosis ditransfer hari ke 8.
f. Prosedur transfer
 Pada saat teknik menempatkan tangannya di dalam rectum, vulva dibuka dan transfer gun yang telah ditutupi cover sheath dimasukan ke dalam vagina oleh seorang asisten.
Gun harus masuk melewati cervix hingga masuk ke salah satu tanduk uterus dimana ovariumnya mengandung CL (ipsilateral). Tanduk uterus ditinggikan dan diluruskan di depan unjung gun.
Ujung gun harus dimasukan 5-10 cm melewati external bifurcation.
Sangat penting diperhatikan adalah jangan sampai melukai bagian dinding uterus selama proses transfer embrio. Jika terdapat tekanan dari uterus, jangan dipaksa, tunggu hingga relaks.
Jika posisi yang diinginkan sudah diperoleh, maka embrio ditempatkan pada posisi tersebut.
Bila cervix terlalu sempit dan sulit dimasuki gun, maka dapat dibantu dengan menggunakan expander cervix yang berukuran kecil.

Manfaat dan Keunggulan Transfer Embrio

Adapun manfaat teknologi transfer embrio adalah:
Meningkatkan mutu genetik ternak.
Mempercepat peningkatan populasi ternak.
Berpotensi mencegah berjangkitnya penyakit hewan menular yang ditularkan lewat saluran kelamin.
Mempercepat pengenalan material genetik baru lewat ekspor embrio beku.
Meningkatkan penyediaan sumber bibit unggul.
Memanfaatkan sapi lokal yang kurang unggul untuk menghasilkan keturunan yang unggul.
Meningkatkan pendapatan masyarakat

Keunggulan teknologi transfer embrio dibandingkan inseminasi buatan adalah Perbaikan mutu genetik pada IB hanya berasal dari pejantan unggul sedangkan dengan teknologi TE, sifat unggul dapat berasal dari pejantan dan induk yang unggul, Waktu yang dibutuhkan untuk memperoleh derajat kemurnian genetik yang tinggi (purebred) dengan TE jauh lebih cepat dibandingkan IB dan kawin alam. Dengan teknik TE, seekor betina unggul mampu menghasilkan lebih dari 20 – 30 ekor pedet unggul per tahun, sedangkan dengan IB, hanya dapat menghasilkan satu pedet per tahun. Melalui teknik TE dimungkinkan terjadinya kebuntingan kembar, dengan jalan mentransfer setiap tanduk uterus (cornua uteri) dengan satu embrio



























BAB III

PENUTUP


Kesimpulan

Teknologi TE (transfer embrio) pada sapi merupakan generasi kedua bioteknologi reproduksi setelah inseminasi buatan (IB). Pada prinsipnya teknik TE adalah rekayasa fungsi alat reproduksi sapi betina unggul dengan hormon superovulasi sehingga diperoleh ovulasi sel telur dalam jumlah besar. Sel telur hasil superovulasi ini akan dibuahi oleh spermatozoa unggul melalui teknik IB sehingga terbentuk embrio yang unggul. Embrio yang diperoleh dari donor dikoleksi dan dievaluasi, kemudian ditransfer ke induk resipien sampai terjadi kelahiran. TE memungkinkan induk betina unggul memproduksi anak dalam jumlah banyak tanpa harus bunting dan melahirkan. TE dapat mengoptimalkan bukan hanya potensi dari jantan saja tetapi potensi betinaberkualitas unggul juga dapat dimanfaatkan secara optimal. Pada proses reproduksialamiah, kemampuan betina untuk bunting hanya sekali dalam 1 tahun (9 bulan buntingditambah persiapan untuk bunting berikutnya) dan hanya mampu menghasilkan 1 atau 2anak bila terjadi kembar. Menggunakan teknologi TE, betina unggul tidak perlu buntingtetapi hanya berfungsi menghasilkan embrio yang untuk selanjutnya bisa ditransfer(dititipkan) pada induk titipan (resipien) dengan kualitas genetik rata-rata tetapi mempunyai kemampuan untuk bunting

B. Saran
Saran yang dapat kami sampaikan dalam makalah ini ialah sebelum kita melakukan Transfer embrio kita perluh memperhatikan tahap-tahap sebelum melakukan transfer embrio.


DAFTAR PUSTAKA

Laswardi,T 1995. Penerapan Metode Transfer Langsung Pada Kriopreservasi Embrio Sapi Perah.

Supriatna, I dan F.H. Pasarribu. 1992. In Vitro Fertilisasi, Transfer Embrio dan Pembekuan Embrio. Depdikbud, DIKTI dan PAU IPB Bogor.

Toelihere, M.R. 1981. Fisiologis Reproduksi pada Ternak. Angkasa. Bandung.

Wahjuningsih,2010. Pengaruh Konsentrasi Etilen Glikol dan Lama Paparan Terhadap Tingkat Fertilisasi In Vitro Oosit Sapi. Vol 4 No 2. September 2010