El microscopio

1590


Zaccarias Janssen inventa el microscopio


1665


Robert Hooke creo el primer microscopio compuesto.


1666


Publicación del libro "Micrographia", donde se acuña el termino "célula"















1673


Antoni Van Leewenhoek inventa su propio microscopio simple


1674


Descubrimiento de los glóbulos rojos, las bacterias y el esperma humano


1900's


Popularización de los modelos de las empresas Leitz y Zeiss














Tipos de microscopio
Microscopio de fluorescencia
Estas moléculas excitadas emiten luz de distintas longitudes de onda, frecuentemente de colores brillantes.
Tinción diferencial con Auraminio para bacilos acido-rápidos es una de las aplicaciones de esta técnica; kits de diagnostico rápido se han desarrollado utilizando anticuerpos fluorescentes para la identificación de agentes patógenos.
El microscopio
Foco: o llamado también fuente de luz, este dirige los rayos hacia el condensador. Es otro factor crítico en la elección de un microscopio. Debe ser una luz blanca potente, con el diafragma totalmente abierto debe cegarnos en muestras poco celulares. Sin un buen foco no se puede trabajar adecuadamente con objetivos de 45x ó 100x.
El microscopio
Condensador: es el lente que concentra la luz sobre la lámina o muestra. Necesita buena fuente luz para que trabaje adecuadamente.

El diafragma: Regula la cantidad de luz que entra al condensador. Es muy útil para buscar cristales en orina, gotas de colesterol o para gente que es muy sensible a la luz. Su calidad no es determinante en la elección de un microscopio y sin una buena (muy buena) fuente de luz, su utilidad es casi nula.
Partes dEl microscopio
Objetivos: de acuerdo a la amplitud de imagen útil existen los convencionales (en los cuales la calidad de imagen de las zonas laterales no es buena) que son la mayoría, los semiplancromáticos que tienen una calidad de imagen central más amplia (ideal para citología, histología y hematología) y los plancromáticos que son los objetivos tipo pantalla plana en los cuales uno obtiene la misma calidad de imagen en las zonas laterales como en el centro.

Partes dEl microscopio
Objetivos: son los lentes que están más cerca de la muestra. Su calidad es crítica para la elección de un microscopio. Un microscopio con malos oculares no sirve, es como un ecógrafo con transductores malogrados. Existen en medidas de 4x, 10x, 40x, 45x y 100x (inmersión).
Partes dEl microscopio
Oculares: pueden ser uno (monoculares) o dos (binoculares). Los oculares son donde posamos los ojos, es decir los lentes más cerca del observador y su función es ampliar la imagen de los objetivos. Muchos son ajustables para mejor comodidad del observador.
Los oculares no son críticos para determinar la calidad del microscopio ya que su desgaste es lento y su reposición es económica. Algunos oculares vienen con puntero para fines educativos y otros con regla para medir las estructuras evaluadas.
Partes dEl microscopio
Dependiendo del tipo de microscopio y de la complejidad del mismo, las partes que lo componen pueden variar, desde pequeños cambios mecánicos o de diseño, hasta complejos cambios en el diseño del sistema óptico.
En general, se tienen los ajustes mecánicos, los dispositivos ópticos y las estructuras de soporte.
Historia Del microscopio
Historia Del microscopio
¿Qué es El microscopio?
Es un instrumento que sirve para ver objetos demasiados pequeños para ser vistos con claridad por el ojo humano.
Es comúnmente usado por los científicos e investigadores para ver los detalles en los objetos pequeños, tales como bacterias, insectos minúsculos, polen y las células de los tejidos vivos.
El microscopio
Soporte: es la base o "frame" del microscopio, sobre él se arma el equipo y existen varias formas de soporte pero casi todas bastante ergonómicas. Mientras más complejo es el equipo, mas abultado es el soporte aunque hoy en día los equipos son bastante compactos.
El microscopio
Platina: lugar donde se coloca la lámina o muestra. Existen las más rudimentarias en las cuáles se arrastra la lámina con la mano, las mecánicas que se mueven con perillas y un ajusto análogo, y las electrónicas que se manejan con botones.
El microscopio
Cabezal: contiene los sistemas de los oculares y pueden ser monoculares, binoculares, trinoculares, de dos cabezales binoculares para fines educativos o de cinco para enseñanza especializada.
Tipos de microscopio
Microscopio electrónico
Es el más sofisticado de los microscopios conocidos en la ciencia. El microscopio electrónico utiliza lentes electrostáticos y electromagnéticos y a través de los electrones ilumina un objeto, magnificando una imagen hasta 2 millones de veces mientras que la luz del microscopio lo hace solo 2 mil veces. El microscopio electrónico utiliza una onda larga de un electrón llamado Broglie wavelength.
Tipos de microscopio
Microscopio de luz polarizada
Es un microscopio óptico al que se le han añadido dos polarizadores (uno entre el condensador y la muestra y el otro entre la muestra y el observador). El material que se usa para los polarizadores son prismas de calcita, que dejan pasar únicamente la luz que vibra en un único plano (luz polarizada). Esta luz produce en el campo del microscopio claridad u oscuridad, según que los dos prismas estén paralelos o cruzados.
Tipos de microscopio
Microscopio por contraste de fase
El microscopio de contraste de fase permite la examinación de organismos vivos sin tinción. Para la microscopia de contraste de fase, se usan condensadores y objetivos especiales.
Estos alteran la relación de fase de la luz que pasa a través del objeto y la que pasa alrededor de él.
Tipos de microscopio
Microscopio de campo oscuro
En este tipo de microscopia, el campo de visión es oscuro y las estructuras están iluminadas. Un condensador especial es utilizado, el cual deflacta la luz en un cierto ángulo con respecto a la muestra.
Se usa para observar bacterias como treponemas (sífilis) y leptospiras (leptospirosis)
Tipos de microscopio
Microscopio de campo claro
Es el tipo de microscopia mas común, en ella se utiliza una luz clara de alta intensidad que al interactuar con los organismos forma una imagen debido a las diferencias de densidades en ellos.
Se utiliza por lo general con preparaciones tincionadas, y el uso de uno u otro tinte dependerá de las características de cada estructura u organismo.
Tipos de microscopio
Microscopio de luz compuesto
Es el microscopio mas común, se usa en microbiología. Consiste en dos sistemas de lentes (combinación de lentes) para magnificar la imagen. Cada lente tiene un poder de magnificación distinto. Un microscopio de luz compuesta con un solo ocular se llama monocular y si tiene dos oculares se llama binocular.
Principio de funcionamiento
El funcionamiento del microscopio consiste en la transmisión de luz enfocada a través de un objeto que se llamara "muestra", el cual produce una sombra; esta señal lumínica transmitida posterior a la muestra pasa por unos lentes (objetivos), los cuales amplifican el tamaño de la sombra y lo transmiten hacia los oculares los cuales terminan de amplificar y acomodar la imagen para que sea visible por el ojo.
El microscopio
Micrométrico: tornillo de enfoque para acercamiento y alejamiento más sutil. Se usa para aumentos de 45x y 100x. Suele desajustarse con el paso del tiempo y alejarnos la imagen sin nosotros desearlo. Requiere mantenimiento preventivo periódico.
El microscopio
Revólver: es donde se alojan los objetivos. Pueden tener espacio para tres, cuatro, cinco y hasta seis objetivos.
Ajuste Macrométrico: tornillo de enfoque para acercamiento y alejamiento rápido. Se usa para los aumentos de 4x y 10x.
Sistemas de imágenes médicas
Semana 2
Ing. Nelson Elías Salinas Bustillo
Tipos de microscopio
Micro microscopio
Desarrollo de un microscopio de fluorescencia miniatura.
Microscopio óptico de campo claro
El microscopio óptico de campo claro es el más común de los microscopios de luz, su uso principal es en biología y en laboratorios de histología.
Para la tinción de las células se pueden usar tintes ácidos (Eosina, fucsina acida) o tintes básicos (Cristal violeta, safranina, verde malaquita)
Mantenimiento del microscopio
Almacenamiento e instalación
Instalar el microscopio en una mesa solida y a nivel. Cualquier equipo que genera vibración no debe ser colocado cerca de los microscopios. (centrifugas, refrigeradoras, etc.)
El alto de la mesa debe ser conveniente para el usuario. Como una medida adicional es conveniente usar un banco con altura ajustable.
Mantenimiento del microscopio
Almacenamiento e instalación
La mesa deberá estar lejos de fuentes de agua, lavamanos y fregaderos donde se usen químicos, para prevenir daños al microscopio por salpicadura de agua o químicos.
Si el microscopio no tiene fuente de luz propia, se deberá colocar cerca de una ventana, fuera del alcance de la luz solar directa y se deben hacer arreglos para proveer una lámpara.
Nooooo!
Mantenimiento del microscopio
Almacenamiento e instalación
Dentro de lo posible (muy preferiblemente), la sala donde se coloque el microscopio debe mantenerse libre de polvo y no debe ser un lugar húmedo.
Cuando el microscopio no este en uso, se debe mantener cubierto con un cobertor de polietileno o plástico, además de tomar las medidas antimicóticas necesarias.
Mantenimiento del microscopio
Almacenamiento e instalación
En ambientes húmedos, se debe guardar el microscopio en un gabinete adaptado de una bombilla (5 a 40 W), la cual se encenderá de noche para reducir la humedad.
Si el microscopio se usa esporádicamente y se mantiene almacenado, hacer esto en un bolsa hermética. (con 100g de agente de secado)
Mantenimiento del microscopio
Cuidado de los lentes
Se debe evitar la acumulación de polvo y de aceite de inmersión en los objetivos y los oculares.
No se debe permitir que el aceite de inmersión haga contacto con ningún lente (además del 100x).
Siempre mantener los objetivos guardados de manera que se proteja la parte inferior de estos. Se debe sellar el orificio del revolver que dejan los objetivos al removerlos.
Mantenimiento del microscopio
Como remover el polvo de los lentes
Buscar polvo en los lentes (objetivos, oculares, condensador y lentes de iluminación) si la imagen aparece borrosa o con puntos negros.
Si la mancha negra se mueve cuando se rota el ocular, quiere decir que hay suciedad en el ocular.
Si la mancha se mueve al mover la platina o el revolver, quiere decir que la mancha o suciedad esta ahí.
Si ambos se descartan, entonces se debe asumir que la suciedad esta en el objetivo. Polvo en los objetivos se muestra como puntos solo si esta dentro de los mismos. Si el polvo esta fuera se ve borroso.
El polvo puede ser removido SOLO con un pincel de pelo de camello o con una brocha de aire. El polvo dentro del objetivo se puede remover con un pincel de pelo de camello suave.
Mantenimiento del microscopio
Como remover aceite de los lentes
La presencia de aceite en los lentes provoca una visión borrosa a través del ocular. La localización del aceite se puede realizar igual que en el procedimiento anterior.
Si aun después de la limpieza la imagen sigue borrosa, el lente se daño permanentemente y debe ser cambiado o reemplazado.
La limpieza se debe hacer con limpiador de lente y con papel para lente, de manera suave y sin aplicar fuera contra el lente.
Si aun después de reemplazar el lente la imagen sin borrosa, probablemente hay sucio u hongos en los prismas del tubo ocular. Los hongos se ven como trazos, puntos o capaz.
Mantenimiento del microscopio
Inspección del objetivo
CUIDADOSAMENTE desenrosque el objetivo del revolver.
Use una lupa o el ocular como magnificador.
Tome el objetivo con una mano, con la lente frontal bocarriba.
Tome el ocular con el lente superior bocabajo.
Inspeccione el objetivo, buscando raspones, gritas, deterioro del sello o aceite en las orillas del lente.
Tipos de microscopio
Microscopio de fluorescencia
En la microscopia de fluorescencia la muestra se tinciona con fluorocromos/fluorocromos complejos. Luz de alta de energía o de corta longitud de onda (de lámparas halógenos o lámparas de vapor de mercurio) se usan para excitar moléculas dentro de la muestra o tincionar moléculas adheridas a esta.
Microscopio óptico de campo claro
En algunas técnicas de campo oscuro se hace uso de filtros para modificar el patrón de luz.
El filtro azul sirve para obtener una luz más natural de bombillas comunes.
Los filtros de densidad neutral se usan para reducir el brillo sin cambiar el color de fondo.
Los filtros verdes son útiles en algunos otros exámenes.
Microscopio óptico de campo claro
En el video siguiente podrá observarse una resumida explicación de las partes del microscopio y de su uso. Así como algunos consejos relacionados con su cuidado luego de su utilización para cualquier examen.
Microscopio óptico de campo claro
Las tres piezas ópticas principales de este microscopio son:
El condensador
Los objetivos
Los oculares
El condensador se encarga de iluminar la muestra mediante la convergencia de un haz de luz paralelo preveniente de una fuente de luz (natural o artificial).
Microscopio óptico de campo claro
Los objetivos, forman una imagen magnificada invertida (boca abajo) de la muestra. Mientras que los oculares magnifican la imagen formada proveniente de los objetivos. Esta imagen se forma debajo del plano de la platina.
La magnificación total será producto de ambos el objetivo como el ocular.
(Si la magnificación del ocular es 10x y se usa el objetivo de 100x, diremos que la imagen será 1000x veces mayor que su tamaño original.)
Microscopio óptico de campo claro
En aplicaciones biológicas, las observaciones de campo claro son usadas ampliamente para tinciones o pigmentos naturales o especímenes altamente contrastados montados en un porta objetos. 
Esta técnica es ampliamente usada en patología para ver secciones de tejidos fijos o películas celulares/frotis. 
Microscopio óptico de campo claro
Rutina de operación
Asegurarse que el voltaje de alimentación es igual al requerido por el microscopio.
Encender la fuente de luz (asegurarse de que se encuentre en el valor mas bajo).
Colocar la muestra en la platina. Asegurarla con el sistema mecánico de sujeción.
Microscopio óptico de campo claro
Rutina de operación
Una vez enfocado, utilizar el ajuste micrométrico para terminar de ajustar la imagen hasta que esta se vea clara. (ver punto 10)
El diafragma debe estar abierto en un 70-80% para que existe un campo claro homogéneamente iluminado.
Se debe ajustar la distancia interpupilar de manera que ambos campos de visión (OI – OD) sean uno.
Microscopio óptico de campo claro
Rutina de operación
Para apagar el microscopio, primero se debe bajar la platina hasta su posición mas baja.
Asegurarse de cerrar el diafragma y bajar la intensidad de luz al mínimo.
Apagar el microscopio y retirar la muestra.
Limpiar cualquier mancha. Colocar el protector.
Microscopio óptico de campo claro
Rutina de operación
Rotar el revolver hasta que el objetivo de 4x este colocado (se debe escuchar un ligero clic)
Subir la platina a su posición mas alta utilizando el ajuste macrométrico.
Mover la platina de manera suave hasta obtener el enfoque adecuado (lograr ver siquiera una mancha de color)
Microscopio óptico de campo claro
Rutina de operación
Al momento de realizar el enfoque, se debe realizar usando el ojo derecho.
Proceder a enfocar la imagen con el ojo izquierdo, pero moviendo el anillo de ajuste de dioptrías.
Se puede cambiar el objetivo si se desea (recordar colocar una gota de aceite de inmersión para utilizar el objetivo de 100x)
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1674
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1900's