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Desarrollo de la crioconservaci6n de germoplasma vegeta/ en Cuba zs, Maria T Gonzalez-Arnao,
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Caridad Urra,2 Marcos Martlnez,3 Marla de los Angeles Torres,4 Manuel Martlnez,5 Tomas Moreira,2 Rodobaldo Ortiz5 1
Dpto. Biologfa Vegetol. Facultad de Biologfa. Universidad de La Habana. Calle 25 No. 455, entre I y J, Vedado, Ciudad de La Habana, Cuba. Fax: (53-7) 32 1321; E-mail:
[email protected] 2Centro Nacional de lnvestigaciones Cientificos. Ciudad de La Habana, Cuba. 3Centro de Bioplantas. Universidad de Ciego de Avila. Ciego de Avila, Cuba. "lnstituto Nacional de lnvestigaciones Fundomentales de la Agricultura Tropical. La Habana, Cuba. 5lnstituto Nacional de Ciencias Agricolas. La Habana, Cuba.
fntroducci6n Este trabajo resume el aporte cientffico de Cuba al desa rrollo de tecnologfas para la preservacion segura y a largo plaza de germoplasma vegetal de origen tropical. La crio conservacion consiste en el almacenamiento a tempera turas ultrabajas, preferiblemente la de! nitrogeno lfquido (: 196 °C}, Actualmerite, este rnetodo es el unico factible para la preservacion de material biologico de interes du rante pericdos teoricamente ilimitados. Las muestras orioconservadas se mantienen en el reducido espacio de termos y estan exentas de las inconvenientes clirnaticos, biologicos y geograficos de! habitat natural. Se definen metodologfas para crioconservar varias formas cultivables in vitro (apices, callas ernbriogeni cos y brotes rneristematicos) de cinco cultivos de im portancia econornica, alimentaria y biorecnologica como la cafia de azucar, el platano, el cafe, la pifia y las cftricos. Los metodos desarrollados para los apices de cafia, pifia y cftricos, constituyen las primeros repor tes en el ambito internacional.
Descripci6n del resultado Con el programa de investigaciones sabre la caria de azu car, se logro establecer metodologfas de crioconservacion para apices [14] y callas embriogenicos [5], que permi ten preservar las recursos geneticos de este culti vo y las lfneas celulares empleadas en los programas de rnejora miento y semilla artificial, respectivamente. Los estu dios abarcaron la extension exitosa de dichas tecnologfas a un gran numero de variedades de diferente complejidad, adaptacion in vitro y diversidad geografica. Se evaluo la estabilidad genetica en condiciones de campo mediante metodos bioquimicos, histologicos ya traves de la revi sion de numerosas caracterfsticas rnorfologicas, lo que permitio comprobar que el almacenamiento prolongado (hasta catorce meses) en nitrogeno lfquido, no indujo modificaciones geneticas ni afecto los niveles de viabili dad y la obtencion de nuevas plantas [4]. En el cultivo platano, el comienzo de las investigaciones requirio la obtencion, por cultivo in vitro, de una estructura nueva (brotes meristematicos) mas resistente al frio y a los tratamientos crioprotectores [6]. Se logro la crioconser vacion exitosa de tres genotipos en peligro de extincion pertenecientes al banco de germoplasma, y se realizaron las estudios de estabilidad gcnetica en condiciones de campo. En el caso del cafe, las metodologfas desarrolla das para callos ernbriogenicos [7] pennitieron conservar el material de partida de los trabajos de mejoramiento. Para los cftricos, se definio un protocolo de crioconser vacion para callas ernbriogenicos mediante el empleo de un cultivar comercial de naranja dulce [8]. Tambien se
establecio una metodologfa para conservar los apices de diferentes especies patrones (9, 10] y actualmente se investiga con material de plantas adultas. En el caso de la piiia, el metodo de crioconservacion establecido se ex tendio con exito a diferentes variedades [ 11] y se aplica a mayor escala en la actualidad.
fmportancia del trabajo Los aportes tecnologicos realizados para el desarrollo de la crioconservacion de germoplasma vegetal tiene un gran impacto cientffico nacional e internacional. Par otra par te, el trabajo tiene un alto valor estrategico y social, ya que la implantacion de estos rnetodos permite conservar especies que se encuentren en peligro de extincion, con tribuye a eliminar las perdidas por condiciones climaticas adversas u otras causas, y asegura la preservacion de la biodiversidad. Desde el punto de vista economico, es posible reducir el numero de replicas en el banco de ger moplasma en campo, con el consiguiente ahorro de su perficies cul ti vables, mano de obra, etc. A escala de labo ratorio, influye en la disminucion de los gastos por concepto de cornpra de reactivos, consumo de electrici dad y dedicacion de personal especializado.
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~ Autor de correspondencio
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Humanizaci6n de epitopos Ten las regiones variables murinas de un anticuerpo que reconoce al receptor del factor de crecimiento epidermico: obtenci6n de inmunoglobulinas de menor inmunogenicidad 13.
Cristina M Mateo de Acosta del Rio, Josefa Lombardero Valladares, Ernesto Moreno, Rolando Perez Rodriguez
Centro de lnmunologfo
Molecular.
Colle 206 No. 1926, Cubonoc6n, Ployo, Ciudod de Lo Hobono. Fox: (53-7) 33 5049; E-mail:
[email protected]
lntroducci6n Existen numerosas evidencias experimentales que apun tan a la relacion existente entre el sistema EGF/EGFR (factor de crecimiento epiderrnico/receptor del factor de crecimiento epiderrnico) y el cancer, por lo que no es sorprendente que este sistema se haya convertido en un blanco atractivo para el diseiio de nuevos medicamentos antitumorales. Diferentes grupos de trabajo, incluido el del colectivo de aurores, han obtenido anticuerpos mo noclonales bloqueadores de la seiializacion del receptor. Estos anticuerpos inhiben el crecimiento de tumores hu manos en ratones atimicos. Sin embargo, los anticuerpos murinos han resultado demasiado inrnunogenicos en hu manos, lo que dificulta sus aplicaciones terapeuticas.
Materiales y Metodos Se redisefio el Anticuerpo Monoclonal R3 (AcM R3) como una inmunoglobulina humana IgG 1, mediante la transplantacion de los CDR (regiones determinantes del anticuerpo murino, en de la complementariedad) los marcos (FR) de las regiones variables humanas de las cadenas pesadas y ligeras Eu y Rei, respectiva mente. Medi ante la utilizaci6n de este sistema como modelo, se evalu6 un nuevo metodo de humanizaci6n mucho mas simple que el metodo tradicional, basado en el caracter de antfgeno Tdependiente de las inmunoglobulinas yen la alta homo logia existente entre las inmunoglobulinas murinas y humanas. El rnetodo consiste en sustituir aquellos resi duos murinos incluidos en los posibles epitopos T de los rnarcos de las regiones variables, por los que se encuen tran en la misma posici6n de las inmunoglobulinas huma nas de mayor homologfa, excepto aquellos residues criti cos en la conforrnacion de los CDR. Los posibles epitopos Ten las regiones Y11 (region variable de cadena pesada) y
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V K (region variable de cadena ligera) del R3, fueron predi chos por el programa AMPHI.
Resultados y Discusi6n Se obtuvo un anticuerpo monoclonal reformado hR3 neutralizante del EGFR, con una K; de 10·8M, el cual ha sido objeto de seis solicitudes de patente. Para obtener este anticuerpo fue necesario clonar y secuenciar la region variable
