DETERMINACIÓN DE TRIGLICÉRIDOS EN SUERO UTILIZANDO EL MÉTODO GPO-PAP (PRUEBA ENZIMÁTICA COLORIMÉTRICA PARA TRIGLICERIDOS CON FACTOR ACLARANTE DE LIPIDOS (LCF)) PARA LA CUANTIFICACIÓN POR ESPECTROFOTOMETRÍA VISIBLE

Integrantes
Jessica Sánchez
Daniel Vaca
TITULO DE LA PRÁCTICA
DETERMINACIÓN DE TRIGLICÉRIDOS EN SUERO UTILIZANDO EL MÉTODO GPO-PAP (PRUEBA ENZIMÁTICA COLORIMÉTRICA PARA TRIGLICERIDOS CON FACTOR ACLARANTE DE LIPIDOS (LCF)) PARA LA CUANTIFICACIÓN POR ESPECTROFOTOMETRÍA VISIBLE
OBJETIVOS
Determinar la concentración de los niveles de triglicéridos en la sangre.
Extraer las muestras de sangre de los estudiantes del curso de bioquímica.
Utilizar el kit apropiado para el análisis de triglicéridos en la sangre.
MARCO TEÓRICO
Son lípidos formados por una molécula de glicerol esterificado con tres ácidos grasos (pueden ser distintos), se almacena en forma de una gran gota ocupando casi todo el citoplasma del adipocito, su almacenamiento secundario es en el hígado, es la principal forma de almacenamiento de energía en las células. Se transportan en la sangre unido a proteínas.
Los triglicéridos que se encuentran en el torrente sanguíneo son derivados de los alimentos que consumimos, especialmente de las grasas y los carbohidratos. Los alimentos que no consumimos en el momento en forma de energía, se convierten en triglicéridos y son transportados a las células grasas para almacenarse.
La enzima llamada lipasa la que actúa en el enlace éster, lo hidroliza y libera el ácido graso. El duodeno no puede absorber los triglicéridos, por lo que debe ser convertido en ácidos grasos y monoglicéridos. Las hormonas son las encargadas de liberar esos triglicéridos para convertirlos en energía según las necesidades del cuerpo.

Funciones
Almacén molecular de energía
Fuente de calor
Envoltura protectora de los órganos vitales con capacidad de amortiguar golpes
Aislante térmico
VALORES DE REFERENCIA
Los siguientes valores discriminantes universales han sido establecidos por el US National
Institutes of Health y también aceptados en otros países para la evaluación del riesgo.
Hasta 150 mg/dL = 1,7 mmol/L Bajo

BAJO
150-199 mg/dL = 1,70-2,25 mmol/L Dudoso

DUDOSO
200-499 mg/dL = 2,26-5,64 mmol/L Alto

ALTO
> 500 mg/dL = > 5,65 mmol/L Muy alto

MUY ALTO

La concentración de triglicéridos en la muestra se calcula a partir de la siguiente fórmula general:
C = Absorbancia de la muestra/Absorbancia del estándar
Para calibrar el Patrón de Triglicéridos suministrado se multiplica por 200 para obtener en mg/dL triglicéridos y por 2.28 para obtener en mmol/L triglicéridos
MATERIALES

Torundas
Torniquetes
Jeringas de 5 mL
Tubos morados
Tubos de vidrio pequeños
Cubetas espectrofotométricas
Gradillas
Micropipetas
Guantes

EQUIPOS
Centrifuga
Espectrofotómetro o fotocolorímetro
Baño María
REACTIVOS
Alcohol
Kit para análisis de triglicéridos (Reactivo A, B y Estándar)

PROCEDIMIENTO
Se procedió a sacar la muestra de sangre del compañero de laboratorio, teniendo cuidado y las debidas precauciones.
Se colocó la muestra de sangre en un tubo de ensayo para posteriormente centrifugarlo durante 5 minutos.
Con la ayuda de la micropipeta se tomo el suero y se colocó en los tubos acorde a al siguiente esquema.

Pipetear
Blanco
Estándar
Muestra
Muestra
-
-
10 µL
Estándar
-
10 µL
-
Reactivo de trabajo
1 mL
1 mL
1mL

Se agito bien e incubó los tubos durante 20 min a temperatura ambiente (18 a 25) °C
Se pasó al uso de espectrofotómetro a 505 nm y se anotó cada una de las absorbancias de las muestras.
RESULTADOS PRIMAROS:
Reacciones positivas o Reacciones negativas

GPO (GLICEROL 3 FOSFATO OXIDASA)
POD (PEROXIDASA)

RESULTADOS Y CÁLCULOS
Valores de absorbancia y concentración
Estudiante
ABC estándar
ABS muestra
Concentración (mg/dl)
David Salgado
0.234
0.564
482.05
Cristina Aguilera
0.234
0.187
159.82
Dennisse Del Castillo
0.271
0.242
223.04
Ariana Drouet
0.217
0.107
98.62
Jessica Sánchez
0.213
0.036
33.803
Daniel Vaca
0.213
0.123
115.49
Alejandro Estrella
0.136
0.029
42.65

CONCLUSIONES Y DISCUSION
Haciendo una comparación general de los resultados se puede observar que los primeros tres análisis difieren en gran medida con respecto al resto, esto sucedió ya que la el reactivo de trabajo podría haber estado contaminados con sangre de algún estudiante de la anterior práctica, lo cual lo cual provoco una gran variación en los datos obtenidos.
Gracias a bibliografía, se ha determinado que la concentración de triglicéridos en la sangre de los alumnos del curso está dentro de los rangos normales, a excepción de las tres primeras muestras del análisis que ya se explicó anteriormente. Sin embargo estos datos no pueden ser tomados con demasiada seriedad, ya que como es una práctica hecha por alumnos, siempre hay una gran tendencia a cometer errores, por ello lo recomendable es acercarse a un centro de salud para un correcto análisis de sangre donde ya suele estar automatizado el proceso para una mayor exactitud.
Las pruebas para determinar la concentración de triglicéridos en la sangre no cuantifican al colesterol pues los triglicéridos son grasas, el colesterol no lo es. El colesterol es una sustancia cerosa y sin olor.

CUESTIONARIO:
Qué clase de lípidos son los triglicéridos?
Son los constituyentes principales de los aceites vegetales y las grasas animales. Los triglicéridos tienen densidades más bajas que el agua (flotan sobre el agua), y pueden ser sólidos o líquidos a la temperatura normal del ambiente. Es un compuesto químico que consiste de una molécula de glicerol y tres ácidos grasos (saturados o insaturados).
Cómo se transportan los triglicéridos en la sangre?
Son transportados del intestino al hígado por los quilomicrones formados por trigicéridos, colesterol y apolipoproteínas los cuales dejan su contenido en el hígado para sintetizar nuevamente Los cuales serán transportados hacia los tejidos extrahepaticos por lipoproteínas de tipo VLDL (precursoras de las IDL y LDL).
Aplicaciones que tienen los triglicéridos en el organismo
Los triglicéridos son una forma de almacenamiento de energía que se deposita en el músculo y en el tejido adiposo y son gradualmente liberados y metabolizados entre las comidas, de acuerdo con las necesidades de energía del organismo.
Son buenos aislantes térmicos al almacenarse en el tejido adiposo.
Es una de las principales fuentes de energía durante la degradación de las mismas.
Brinda protección mecánica a los tejidos cubiertos por tejido adiposo.
Describa la ruta metabólica de la degradación de triglicéridos
La β-oxidación es la eliminación secuencial de fragmentos bicarbonatados (dos carbonos), desde el extremo carboxilo (entre Cα y Cβ) del ácido graso. Mediante una serie de pasos que por deshidrogenación, hidratación y oxidación darían lugar las correspondientes moléculas de β-cetoácido, que finalmente se escindirían por tiolisis. La idea fundamental es que al final de cada ciclo de β-oxidación, el Cβ del ácido graso de partida se convertiría en el "Carboxilo" del siguiente ciclo (excepto por supuesto en el último ácido graso de la ruta el Acetato).
Las α-Oxidaciones supondrían es la eliminación secuencial del carbono carboxílico en forma de CO2 (el enlace Cα-COOH), el Cα del ácido graso de partida se convertiría en el "Carboxilo" del siguiente ciclo (se dan en ácidos grasos ramificados con grupos metilos).
Las ω-oxidaciones son muy minoritarias. Se dan en los peroxisomas. Suponen la hidroxilación del extremo opuesto al carboxilo de un ácido graso, cuya oxidación posterior generaría un nuevo extremo carboxílico.
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS:
Disponible en línea
http://medmol.es/glosario/51/
http://www.clevelandclinic.org/health/sHIC/doc/S11117.pdf
http://trigliceridos.com.es/
http://www.ojocientifico.com/4607/que-son-los-trigliceridos
http://www.medicinapreventiva.com.ve/laboratorio/trigliceridos.htm