CULTIVO DE LA DIATOMEA BENTÓNICA Amphora cf. marina CON UNA ZEOLITA CUBANA ENRIQUECIDA.

June 24, 2017 | Autor: A. Plasencia Vázquez | Categoría: Microalgae cultivation
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Descripción

Rev. Invest. Mar. 25(2): 151-158, 2004

CULTIVO DE LA DIATOMEA BENTÓNICA Amphora cf. marina CON UNA ZEOLITA CUBANA ENRIQUECIDA. Alexis H. Plasencia 1, Sylvia Leal 2 *, D. Voltolina

3

y R. Curbelo

4

(1) Museo de Historia Natural de Pinar del Río, Pinar del Rio, Cuba. (2) Centro de Investigaciones Marinas, Universidad de la Habana, Calle 16 No. 114, Playa, CP 11300, Ciudad Habana, Cuba. (3) Centro de Investigaciones Biológicas del Noroeste, Laboratorio de Microalgas UAS-CIBNOR, PO Box 1132, Mazatlán, Sinaloa, México. (4) Empresa Yaguacam, Carretera Cienfuegos-Trinidad, Km 63½, Cienfuegos, Cuba. (*) Autor correspondiente: [email protected] RESUMEN Se cultivó la diatomea Amphora cf. marina a escala de laboratorio, usando dos medios de cultivo (f/2 y h) adicionados con 10, 25, 50 y 100 mg/L de la zeolita cubana CZ tratada con fosfato diamónico. En un experimento separado se probó además el efecto de la sustitución parcial (25, 50 y 75%) o total del medio h con agua de mar adicionada con 25 mg/L de la misma zeolita. En todos los casos se comprobó un efecto positivo de este producto, que se manifestó en general por una mayor tasa de crecimiento después de la fase exponencial. Con el medio f/2, la mayor concentración celular se obtuvo después de cuatro días, mientras que con 25 mg/L el mejor resultado fue el del tercer día, con una tasa de crecimiento significativamente mayor de la registrada en el medio sin zeolita. En el caso del medio h, los mejores resultados se obtuvieron nuevamente con 25 mg/L de CZ el sexto día, cuando los cultivos control ya habían alcanzado la fase de decaimiento. Con este tratamiento, la concentración celular resultó un 50% mayor del valor máximo encontrado en los controles. Los datos del tercer experimento demuestran que no existen diferencias significativas en el crecimiento inicial sustituyendo el 50% del medio h con agua de mar adicionada con zeolita y que con el 25% de sustitución es posible obtener la misma concentración y la misma tasa de crecimiento de las que se obtienen con el medio completo. Palabras clave: productos zeolíticos; diatomeas bentónicas; cultivo de microalgas, Amphora. ABSTRACT The benthic diatom Amphora cf. marina was grown in laboratory-scale cultures with two growth media (f/2 and h), added with 10, 25, 50 and 100 mg/L of the diammonium phosphate-treated cuban zeolite CZ. A separate experiment served to test the possibility of partial (25, 50 and 75%) or total substitution of the h medium with seawater enriched only with 25 mg/L of the same zeolite. In all cases, the results showed a positive effect of this product, with a higher division rate during the phase of slow growth. With the f/2 medium, the highest concentration was found after four days, whereas with 25 mg/L of CZ the best result and a significantly higher growth rate were registered one day earlier. With the h medium, the best results were consistently those obtained with the same amount of CZ and the highest cell concentration, close to 50% higher than the maximum obtained in the control cultures, was noticed on day 6, when the controls had reached the death phase. The third experiment showed no difference in initial growth with up to 50% substitution of the h medium, and with 25% substitution the cell concentrations and the growth rate were not significantly different from those obtained with the full strength medium. Keywords: Zeolitic products, benthic diatoms, microalgae cultures, growth, Amphora.

La utilización de las zeolitas en procesos acuícolas fue propuesta inicialmente con el fin de aprovechar su propiedad de intercambio iónico para el control de la concentración de amonio (Mumpton, 1977). Estudios posteriores demostraron que algunos productos zeolíticos ejercen influencia en la transformación de amonio a nitritos (López-Ruiz y Gómez-Garrudo, 1994) y se ha encontrado también que intervienen en los procesos biológicos relacionados con la descomposición de piensos para peces y que pueden acelerar el proceso de amonificación y modificar la composición de la comunidad bacteriana que se encuentra presente en el agua (Chávez-Sanz y López-Ruiz, 1990).

La adición de zeolitas al agua permite además disminuir la toxicidad de metales pesados (Misaelides y Godelitsas, 1995; Jain et al., 1996; Gómez-Villa et al., 2002) y mantener una concentración de oxígeno más elevada en cultivos de peces evitando su intoxicación a causa de sus propias excretas, lo cual hace posible aumentar la densidad de siembra (Ceballos et al., 1994). Las zeolitas se han utilizado con buenos resultados también para el cultivo de microalgas marinas (López-Ruiz et al., 1995; Voltolina et al., 1997; Leal et al., 2003a), aunque el motivo de este efecto positivo no es todavía conocido. Inicialmente se sugirió que el mejor crecimiento de las diatomeas 151

Plasencia et al.: Cultivo de la diatomea bentónica Amphora cf. marina con una zeolita cubana enriquecida.

pudiera ser debido a una disolución de los silicatos presentes en estos productos (Nieves et al., 2000), pero posteriormente se comprobó que las zeolitas no son solubles en agua o que su disolución es insuficiente para mejorar la producción de los cultivos (Nieves et al., 2002). Además, este tipo de enriquecimiento no explicaría el mejor crecimiento de otras microalgas que no requieren silicatos en el medio (Nieves, 2000).

fósforo de 0.88 y 0.036 mmol/L de N y de P, es uno de los medios más populares para el cultivo de microalgas a nivel comercial (López-Elías et al., 2003) y es además el recomendado para la especie usada en este estudio (Almaguer, 2002). El segundo (medio h) es una variante del anterior, que consiste en duplicar la concentración de los nutrientes mayores y menores, adicionando además 53 mg/L (1.0 mM) de cloruro de amonio, que aumenta la disponibilidad de N y de P hasta 2.76 y 0.072 mmol de N y de P y causa una modificación de la proporción átomo:átomo N/P, desde 24.4 para el medio f/2 a 38.3 para esta variante, la cual se utiliza con mayor éxito del f/2 para el cultivo de microalgas a nivel semimasivo (15 L) en el Centro de Desove Yaguacam (Curbelo, observación personal).

Por otra parte, la utilización de esta propiedad peculiar de las zeolitas es susceptible de ser beneficiosa, ya que permitiría acelerar el crecimiento y mejorar la producción y el rendimiento económico de los cultivos de microalgas que se usan para la alimentación de las larvas y postlarvas de diferentes organismos acuáticos.

En una tercera serie de pruebas, que también se realizó con cuatro repeticiones por tratamiento, el medio h se probó con sustituciones progresivas del 25, 50, 75 y 100% del medio con agua de mar sin nutrientes, adicionada en todos los casos (antes de la dilución) con 25 mg/L de zeolita. Cuatro cultivos con medio h completo sirvieron como control.

En el presente trabajo se investigó esta posibilidad, cultivando la microalga Amphora cf. marina (W. Smith) Van Heurck con dos medios de cultivo adicionados con diferentes cantidades de una zeolita natural enriquecida con fertilizantes. Además se verificó el crecimiento de esta misma especie con diferentes porcentajes de dilución de uno de los medios, utilizando para la dilución un volumen similar de agua de mar adicionada solamente con la misma zeolita.

El producto zeolítico que se utilizó para todas las pruebas es la zeolita natural cubana CZ que procede de los yacimientos naturales de Tasajeras, Provincia Villa Clara, la cual fue facilitada por el laboratorio de Zeolitas de la Universidad de La Habana. Esta zeolita contiene 40% de clinoptilolita, 40% de mordenita y el restante 20% son calcita, cuarzo y feldespato. Químicamente, el 62% es SiO2, el 11.2% Al2O3 y el remanente son óxidos de Ca, Na, Mg, Ti y Fe. Este mineral es tratado con una solución de (NH4)2HPO4 y, después del tratamiento sus respectivos contenidos de nitrógeno y fósforo son 0.012 a 0.014 mmol/g de N y 0.042 mmol/g de P (Rivero y Rodríguez, 1988; Pérez et al., 1991).

MATERIALES Y MÉTODOS La diatomea usada en estos experimentos es una especie bentónica aislada en 2002 en estanques de engorde de camarón de la empresa Cultisur, en Santa Cruz del Sur, Provincia de Camaguey, Cuba (Almaguer et al., 2004), que se mantiene en condiciones controladas como cultivo monoalgal en el laboratorio de inóculos del Centro de Investigaciones Marinas de la Universidad de La Habana.

En todos los casos la concentración celular se verificó diariamente mediante recuentos directos con una cámara de Neubauer, utilizando cuatro submuestras para cada unidad experimental, que se tomaron después de verificar visualmente que la agitación continua por burbujeo profuso y la manual efectuada antes de la toma de muestras, eran suficientes para obtener una distribución aproximadamente homogénea y minimizar o eliminar la adhesión de las células a las paredes y al fondo de los recipientes

Los cultivos se realizaron en matraces erlenmeyer de vidrio Pyrex de un litro, con cuatro repeticiones por cada tratamiento, que se mantuvieron con iluminación continua con luz fluorescente, con una intensidad de 2000 lux. Se suministró aireación constante con aire forzado proveniente de un soplador. La salinidad fue ajustada a 35 ‰ y los cultivos se mantuvieron a la temperatura ambiente. El efecto de la zeolita se verificó adicionando en cada caso 10, 25, 50 y 100 mg/L del producto (Ttos 1 a 4), además de un control sin zeolita (Tto 5), tanto al medio f/2 que al medio h (Guillard, 1975). El primero, con un contenido de nitrógeno y

La tasa de crecimiento poblacional (K) durante las fases de crecimiento activo (exponencial y lento), hasta alcanzar el valor máximo de la concentración 152

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celular, el tiempo medio de duplicación expresado en días (TD) y la producción media diaria (P) en células producidas/día, se calcularon individualmente para cada cultivo usando las ecuaciones:

K=

tratamientos 2 y 3 (25 y 50 mg/L de zeolita), la máxima concentración (o un valor muy cercano, en el caso del tratamiento 3) se alcanzó al final del día 3, cuando los valores medios de K resultaron ser 0.64 en ambos casos, equivalente a 0.92 duplicaciones celulares diarias, en comparación con los valores de 0.54, 0.58 y 0.51 calculados en esa misma fecha para los tratamientos 1, 4 y 5, que equivalen respectivamente a 0.78, 0.83 y 0.74 divisiones/día.

ln (Cf / Ci) tf – ti

Esto parece indicar un efecto positivo de la zeolita, que consistió en una mayor tasa de duplicación en la fase inicial del crecimiento lento, lo cual coincide con los resultados encontrados con Nannochloropsis gaditana por Leal et al. (2003b) y con varias especies de microalgas marinas por Nieves (2000).

ln 2 TD = K

P=

Cf – Ci

Este efecto es evidente revisando los parámetros poblacionales, que demuestran una evidente tendencia a valores más elevados de la tasa de crecimiento para los tres primeros tratamientos, con consiguientes menores tiempos de duplicación y mayores valores de producción diaria, aunque solamente con 25 mg/L de zeolita la tasa de crecimiento resultó significativamente mayor de la calculada para los tratamientos 4 y 5, lo cual indica que el efecto positivo no es una función lineal de la cantidad de zeolita presente en el medio (Tabla 2).

tf – ti Cf y Ci : concentraciones celulares máximas e iniciales de cada cultivo tf - ti : tiempo en días entre el inicio del experimento y el día final de crecimiento activo. Después de comprobar la normalidad e igualdad de varianzas, los datos medios de concentración celular registrados en cada día y las medias de los parámetros poblacionales ya mencionados se compararon mediante pruebas de ANOVA de una vía y, cuando fue el caso, con pruebas de comparaciones múltiples de Tukey, con α= 0.05

El experimento con medio h duró un total de nueve días, en vista de que el crecimiento poblacional continuó entre 5 y 7 días, dependiendo del tratamiento. Esto se puede probablemente relacionar con la mayor disponibilidad de nutrientes, en vista de que con el medio f/2 todos los cultivos se encontraban en fase de decaimiento después del cuarto día, implicando una limitación por nutrientes mayores o menores.

RESULTADOS Y DISCUSIÓN La temperatura osciló entre 23 y 25 ºC durante el experimento con el medio f/2, que es inferior a los 25-27 ºC registrados en las otras pruebas. Por este motivo, en vista del efecto de la temperatura sobre el crecimiento microalgal, que en este caso no fue medido experimentalmente sin modificar las demás variables, no fue posible realizar una comparación global de los resultados obtenidos con los tres medios.

Las máximas concentraciones alcanzadas fueron nuevamente con los tratamientos 2 y 3 (días 6 y 5, respectivamente), que parece confirmar el resultado del experimento anterior. Las pruebas de análisis de varianza encontraron diferencias significativas en cinco de los nueve días de este experimento, en cuatro de los cuales la concentración menor fue la de los cultivos en el medio sin zeolita (control) y en tres de los medios con la menor concentración de este producto. Además, en ningún caso el tratamiento 2 dio resultados inferiores a los otros, que confirma que esta concentración es la más adecuada para el cultivo de esta especie (Tabla 3).

En este experimento, que duró un total de seis días, el crecimiento exponencial terminó después de dos días y las concentraciones máximas se alcanzaron entre el tercero y el cuarto día. Aunque las pruebas de análisis de varianza mediante las cuales se compararon las concentraciones medias registradas en cada tratamiento en cada uno de los días de cultivo no encontraron diferencias significativas (Tabla 1), cabe resaltar que con los 153

Plasencia et al.: Cultivo de la diatomea bentónica Amphora cf. marina con una zeolita cubana enriquecida.

Tabla 1. Concentraciones celulares (x 103 cel/mL) ± DS alcanzadas por Amphora cf. marina con diferentes concentraciones de la zeolita CZ durante 6 días de cultivo con medio de cultivo f/2. Letras diferentes indican diferencias significativas entre datos en la misma línea (α=0.05). Días

Tto 1 10 mg/L 77 215a ± 44.6

Tto 2 25 mg/L 77 234a ± 26.3

Tto 3 50 mg/L 77 305a ± 138.9

Tto 4 100 mg/L 77 269a ± 59.3

Tto 5 Control 77 253a ± 80.2

2

378a ± 41.9

381a ± 54.9

494a ± 74.8

451a ± 51.7

422a ± 164.9

3

388a ± 44.5

520a ± 112.2

524a ± 110.5

439a ± 168.6

351a ± 89.6

4

536a ± 241.3 233a ± 13.2 211a ± 37.6

385a ± 131.5 177a ± 14.8 180a ± 25.3

531a ± 152.7 236a ± 74.9 198a ± 72.8

473a ± 61.8 168a ± 36.4 165a ± 28.8

485a ± 117.3 176a ± 49.3 132a ± 32.9

0 1

5 6

Tabla 2. Velocidad de crecimiento (K) ± DS, tiempo de duplicación (TD) ± DS y producción diaria (PD) ± DS, para los cultivos de Amphora cf. marina con diferentes concentraciones de la zeolita CZ en medio de cultivo f/2. Letras diferentes indican diferencias significativas (α=0.05). Tto 1 2 3 4 5

K 0.47ab ± 0.12 0.63a ± 0.07 0.48ab ± 0.06 0.45b ± 0.03 0.46b ± 0.07

TD 1.57a ± 0.39 1.11a ± 0.11 1.47a ± 0.17 1.54a ± 0.12 1.56a ± 0.26

PD 115a ± 60.25 148a ± 37.43 113a ± 38.19 100a ± 15.33 103a ± 29.29

Por otra parte, la variabilidad entre repeticiones resultó ser generalmente elevada, por lo cual la tendencia a valores mejores para el tratamiento con 25 mg/L de zeolita, seguida en el orden por los de 50 y de 10 mg/L no resultó confirmada por el análisis estadístico de los tres parámetros poblacionales calculados con los datos de este segundo experimento (Tabla 4), durante el cual las tasas de crecimiento y los valores de producción diaria fueron mayores que en la primera prueba, causando un menor tiempo medio de duplicación. Éste resultó ser igual o inferior a un día, y pudiera ser por lo menos en parte causado por la mayor temperatura ambiental, aunque es más probablemente debido a la mayor disponibilidad de nutrientes del medio h.

pocas especies y además la concentración utilizada es similar al límite inferior de toxicidad indicado por estos autores. Considerando que en la mayoría de los casos el efecto principal del amonio consiste solamente en una inhibición temporánea de la utilización de nitratos debida a la absorción preferencial del amonio (Becker, 1994), es concebible que el crecimiento rápido de los cultivos, con entre 3.0 y 3.9 divisiones celulares durante las primeras 24 horas (K = 2.12 a 2.70; TD = 0.327 a 0.256), sea más bien un reflejo de un efecto positivo de la presencia de amonio en este medio, que es el que permite obtener las mayores concentraciones celulares en el Centro de Desove de Camarón Yaguacam (Curbelo, observaciones personales).

De acuerdo a Abalde et al. (1994), inhibir el crecimiento de algunas en bajas concentraciones. Por toxicidad ha sido demostrada

Nuevamente, quedó demostrado un efecto positivo de la zeolita, la cual causó tanto un incremento importante de la concentración celular como una mayor duración de la fase de crecimiento lento,

el amonio puede microalgas, aún otra parte, su solamente para 154

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Tabla 3. Concentraciones celulares (x 103 cel/mL) ± DS alcanzadas por Amphora cf. marina con diferentes concentraciones de la zeolita CZ durante 9 días de cultivo utilizando medio h. Letras diferentes indican diferencias significativas entre datos en la misma línea (α=0.05). Días 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9

Tto 1 10 mg/L 24 256 a ± 49.6 418 b ± 25.2 624 b ± 66.7 1102 a ± 201.2 1303 a ± 681.4 870 b ± 248.3 1112 ab ± 294.2 834a ± 417.8 662a ± 283.7

Tto 2 25 mg/L 24 358 a ± 104.7 700 a ± 85.2 1011 a ± 255.3 1158 a ± 172.1 1108 a ± 312.9 1533 a ± 188.6 1180 a ± 156.1 785a ±211.4 566ab ±71.6

Tto 3 50 mg/L 24 359 a ± 60.3 576 ab ± 67.8 932 ab ± 196.2 969 a ± 273.2 1468 a ± 74.2 1030 ab ± 229.4 1265 a ± 135.4 677a ±143.4 534ab ±106.6

Tto 4 100 mg/L 24 200 a ± 86.8 500 ab ± 114.7 707 ab ± 157.6 704 a ± 353.2 1036 a ± 139.7 1031 ab ± 347.9 777 ab ± 281.9 726a ±143.1 514ab ±8.5

Tto 5 Control 24 270 a ± 90.6 448 b ± 95.7 713 ab ± 127.5 814 a ± 211.3 950 a ± 469.5 690 b ± 113.2 612 b ± 262.0 576a ±180.8 324b ±26.3

Tabla 4. Velocidad de crecimiento (K) ± DS, tiempo de duplicación (TD) ± DS y producción diaria (PD) ± DS, para los cultivos de Amphora. cf. marina con diferentes concentraciones de la zeolita CZ en medio de cultivo h. Letras diferentes indican diferencias significativas (α=0.05). Tto 1 2 3 4 5

K 0.78a ± 0.70a ± 0.82a ± 0.75a ± 0.72a ±

0.11 0.02 0.01 0.03 0.09

TD 0.91a ± 0.12 1.00a ± 0.03 0.85a ± 0.01 0.92a ± 0.04 0.97a ± 0.12

que coincide con los datos de literatura sobre el efecto más notorio de la adición de productos zeolíticos al medio de cultivo de diferentes microalgas (López-Ruiz, 1999; Nieves, 2000).

PD 256a ± 136.29 252a ± 31.55 289a ± 14.84 202a ± 27.93 185a ± 93.90

el aumento de la disponibilidad de nutrientes en el medio de cultivo. El tercer experimento duró ocho días, al final de los cuales todos los tratamientos se encontraban en fase estacionaria o de muerte y las menores concentraciones fueron las registradas con el 75 y 100% de sustitución del medio con agua de mar adicionada solamente con zeolita.

Leal et al. (2003a) cultivaron dos microalgas con medio f/2 adicionado con 10 mg/L de zeolita CZ tratada y no tratada con (NH4)2HPO4 y en ambos casos encontraron un mejor crecimiento de lo que registraron en el medio control. El producto tratado tuvo un mayor efecto con una de las especies probadas, mientras que con la segunda el crecimiento fue similar. En este caso se usó solamente la zeolita tratada, por lo cual es posible que los resultados obtenidos en este experimento reflejen exclusivamente una propiedad intrínseca de esta zeolita, o que ésta haya sido potenciada por

La tendencia general demuestra una mayor producción con el medio completo hasta el sexto día pero, con la excepción del tercer día, la sustitución de hasta el 50% del medio con agua no enriquecida y adicionada solamente con zeolita no causó diferencias significativas en producción. Con el 25% de sustitución, no solamente fue posible 155

Plasencia et al.: Cultivo de la diatomea bentónica Amphora cf. marina con una zeolita cubana enriquecida.

obtener una producción similar que con el medio completo, sino que con este porcentaje se obtuvo la mayor concentración alcanzable en las condiciones de este experimento y además en este caso la variabilidad fue notablemente menor que con todos los demás tratamientos (Tabla 5).

del medio h con agua de mar adicionada con 25 mg/L de la zeolita cubana CZ. REFERENCIAS Abalde, J., A. Cid, P. Hidalgo, E. Torres y C. Herrero (1994): Microalgas: Cultivo y Aplicaciones. Universidad de La Coruña, Monografías, No. 26, 210 pp.

El análisis de los parámetros poblacionales demostró la falta de diferencias significativas entre el crecimiento de esta especie cultivada con el medio completo o con el diluido con el 25% de agua de mar con zeolita, con valores medios de K de 0.61 y 0.56, equivalentes a 0.88 y 0.81 divisiones celulares diarias en el primero y en el segundo caso, y con tasas y tiempos de duplicación significativamente diferentes para las diluciones mayores, lo cual confirma que hasta el 25% del medio h puede ser sustituido con agua adicionada con 25 mg/L de este producto, sin modificar la producción diaria de los cultivos de esta microalga (Tabla 6).

Almaguer, Y.R. (2002): Aislamiento y cultivo de diatomeas bentónicas con vistas a ser usadas en el maricultivo. Universidad de La Habana, Tesis de Licenciatura, 60 pp. Almaguer, Y., E. Alfonso y S. Leal (2004): Aislamiento y cultivo de dos especies de diatomeas bentónicas. Rev. Invest. Mar. 25(1):57-64. Becker, E.W. (1994): Microalgae: biotechnology and microbiology. Cambridge University Press. Cambridge. 293 pp.

En vista de que la disponibilidad de nutrientes disminuyó de un 25% mientras que, aún suponiendo una disolución total del contenido de N y de P de la zeolita tratada, el agua de mar usada para la dilución agregó al medio el 0.31% de P y el 0.008% de N, este resultado parece indicar que el efecto dominante es una propiedad intrínseca de esta zeolita, aunque es posible un efecto secundario causado por la contribución de N y de P al medio de cultivo.

Ceballos, J., A. Peláez, D. de la Paz y A. Fernández (1994): Efecto de la zeolita en dietas para la fase de precría del camarón blanco (Penaeus schmitti). Rev. Cub. Inv. Pesq. 18(5): 10-14. Chávez-Sanz, P. and J. López-Ruiz (1990): Influence of microbial action of zeolites on nitrification. Cuadernos de Química Oceanográfica. 2(3): 175-179.

CONCLUSIONES

Gómez-Villa, H., D. Voltolina, M. Nieves, P. Piña and J. López-Ruiz (2002): Reduction of copper toxicity for two microalgae using artificial zeolites. J. World Aquaculture Soc. 33: 214-219.

El producto zeolítico que se usó tiene un efecto positivo sobre el crecimiento de la diatomea bentónica Ampho ra cf. marina, tanto en el medio f/2 como en el medio h, y la concentración óptima para obtener el mayor efecto es 25 mg/L.

Guillard, R.R.L. (1975): Culture of phytoplankton for feeding marine invertebrate. In: Culture of Marine Invertebrate Animals (W.L. Smith y M.H. Chanley, eds), Plenum Publishing, N.Y. pp: 29-60.

Con el medio h se obtienen concentraciones mayores que con el medio f/2, que indica que la menor concentración de nutrientes del segundo es limitante para la microalga usada en este estudio. La presencia de amonio en el medio h, con una concentración inicial 1 mM, no inhibe el crecimiento de Amphora cf. marina.

Jain, S.K., A.K. Rainzada, S. Shrivastava and K. Jain (1996): Protective action of zeolite on lead toxicity in freshwater fish. Fresenius Environm. Bull. 5: 466-468. Leal, S., G. Delgado, G. Rodríguez, J. López-Ruiz, E. Alfonso y E. Nodas (2003a): Crecimiento de microalgas marinas con diferentes productos zeolíticos. Rev. Invest. Mar. 24(1): 57-62.

El efecto de la zeolita consiste en aumentar la viabilidad de los cultivos y la tasa de división durante la fase de crecimiento lento, que resulta en una producción un 50% superior a la que se obtiene en el medio h sin zeolita.

Leal, S., R. Nodar, G. Delgado y Y. (2003b): Efecto de cinco tipos de zeolíticos sobre el crecimiento de la marina Nannochloropsis gaditana. II

Es posible obtener la misma producción, medida como concentración celular, sustituyendo el 25% 156

Almaguer productos microalga Congreso

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Tabla 5. Concentración celular diaria (x 103 cél/mL) ± DS alcanzadas por Amphora cf. marina con diferentes porcentajes de sustitución del medio h. Los números del 1-5 indican los tratamientos. Letras diferentes indican diferencias significativas entre datos en la misma línea (α=0.05). Días 0 1 2 3 4 5 6 7 8

Tto 1 (25%) 24 196 ab ± 84.1 396 ab ± 111.8 610 ab ± 76.1 607 a ± 97.8 559 abc ± 153.4 717 abc ± 75.9 1202 a ± 137.8 795 a ± 62.2

Tto 2 (50%) 24 183 ab ± 39.9 346 ab ± 81.7 454 bc ± 122.2 548 a ± 51.0 600 ab ± 67.4 709 ab ± 104.0 805 abc ± 206.5 679 a ± 45.9

Tto 3 (75%) 24 147 b ± 16.2 257 b ± 53.2 310 c ± 50.4 315 b ± 27.8 342 bc ± 65.0 474 bc ± 77.4 498 bc ± 128.3 454 b ± 41.0

Tto 4 (100%) 24 108 b ± 34.1 214 b ± 50.2 293 c ± 54.8 346 b ± 43.4 305 c ± 72.9 411 c ± 74.5 367 c ± 49.2 349 b ± 63.4

Tto 5 (Control) 24 260 a ± 26.7 469 a ± 86.1 705 a ± 92.5 677 a ± 137.9 638 a ± 192.1 952 a ± 67.5 865 ab ± 428.1 784 a ± 68.6

Tabla 6. Velocidad de crecimiento (K) ± DS, tiempo de duplicación (TD) ± DS y producción diaria (PD) ± DS, de los cultivos de Amphora cf. marina con diferentes porcentajes de sustitución del medio h. Letras diferentes indican diferencias significativas (α=0.05). Tto 1 2 3 4 5

0.56a 0.50b 0.43c 0.47bc 0.61a

K ± ± ± ± ±

0.02 0.04 0.03 0.03 0.01

TD 1.25cd ± 0.04 1.40bc ± 0.10 1.62a ± 0.12 1.47ab ± 0.10 1.14d ± 0.02

168a 112b 68c 64c 155a

PD ± 19.79 ± 29.29 ± 18.39 ± 12.55 ± 11.24

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