Análise comparativa da atividade inibitória de diferentes compostos sobre a enzima glutationa S-transferase de Cyprinus Carpio

Análise comparativa da atividade inibitória de diferentes compostos sobre a
enzima glutationa S-transferase de Cyprinus Carpio


SANTOS, Rodrigo; RIBEIRO, Eduardo; CANTELE, Maluare; ZANETTE, Juliano
(orientador). Universidade Federal de Pelotas.


Resumo


Introdução

A carpa comum (Cyprinus carpio) é um peixe de grande importância
econômica, sendo empregado também em estudos de toxicologia aquática.
Utilizando esta espécie como referência, avaliou-se indiretamente a
toxidade de contaminantes ambientais potencialmente nocivos, dentre eles o
clorotalonil, o benzo(a)pireno (BaP) e a tricaína (MS-222). O clorotalonil
é um composto orgânico utilizado como anti-incrustante cuja toxicidade em
peixes é pouco conhecida. O BaP é um hidrocarboneto policíclico aromático
(HPA), composto carcinogênico, derivado do petróleo e da combustão. Já a
tricaína é um anestésico isômero da benzocaína e possivelmente possui
alguma influência na atividade das GSTs.
Neste experimento, foram realizados ensaios enzimáticos competitivos
para as três substâncias na atividade das glutationa S-transferase (GSTs),
que são complexos enzimáticos que podem atuar como biomarcadores de
contaminação ambiental. Desta forma, propõe-se estimar de forma indireta, a
capacidade das GSTs em metabolizar estes diferentes compostos.


Metodologia

Extratos correspondentes à fração S9 (sobrenadante obtido pela
homogeneização e centrifugação a 9000 g) de fígado de C.carpio foram
preparados e utilizados em ensaio enzimático espectrofotométrico utilizando
tampão fosfato de potássio com pH 7,0, 1-cloro-2,4-nitrobenzeno (CDNB) e
glutationa reduzida (GSH) na concentração 0,1 M e pH 7,0. O ensaio
espectrofotométrico baseia-se na análise da formação do conjugado GS-CDNB
medido em 340 nm.
Para o ensaio enzimático utilizou-se a temperatura constante em 30ºC,
e três minutos de ensaio. A concentração de CDNB usada para o ensaio
competitivo foi de 1,2 mM de CDNB, que foi escolhida para avaliar o efeito
competitivo do anestésico MS-222 (concentrações de zero, 0,5 e 2 mM), assim
como o do clorotalonil (zero, 0,42 e 4,2 mM) e do benzo(a)pireno (zero, 10
e 40 mM) na atividade das GSTs. Todas as análises foram realizadas em
triplicata. Os valores das médias das atividades enzimáticas foram
comparados utilizando ANOVA-Tukey (p