Aislamiento de bacterias anaerobias a partir de una muestra de suelo

Resumen Las bacterias anaerobias se encuentran ampliamente distribuidas en el medio ambiente y caracterizan por carecer de sistemas que metabolizan el oxígeno, por lo que requieren de condiciones especiales para su cultivo. En el siguiente trabajo se aislaron bacterias anaerobias a partir de esporas, provenientes de una muestra de suelo y mediante dos métodos diferentes. Para ello se prepararon diluciones 10-3 y 10-4 de la muestra y se inocularon placas Petri con agar y medio BHI, y tubos con medio de tioglicolato. Las placas de agar se incubaron en una jarra de anaerobiosis mientras los tubos se incubaron a 28°C durante 48 horas. Ambos métodos lograron encontrar entre 2-4 UFC/g, además de mostrar morfologías de bacilos en el análisis morfológico al microscopio, común de las bacterias anerobias. Las bacterias anaerobias se encuentran ampliamente distribuidas en el ambiente y se caracterizan generalmente por: (i) no crecer en presencia de oxígeno, ya que son susceptibles a especies reactivas del mismo; (ii) necesitar de condiciones de pH y potencial redox especiales; (iii) carecer de sistemas de citocromos para el metabolismo del oxígeno; (iv) y poseer sistemas enzimáticos robustos, muchos de ellos involucrados en la producción de toxinas venenosas para otras células (Somers & Morse, 2010; Haagsma, 1991). Las bacterias anaerobias se pueden dividir en dos de acuerdo a su capacidad para formar esporas, siendo los géneros Clostridium (Gram positivos) y Bacteroides (Gram negativos) los principales constituyentes de este grupo. Las esporas son estructuras bacterianas que les brindan resistencia al calor, congelamiento, químicos y muchos otros ambientes adversos, características de importancia que generan especial atención ya que repercuten en diversas actividades humanas donde pueden llegar a afectar la salud de las personas (Haagsma, 1991; Cousin, 1989). Debido a la sensibilidad de las bacterias anaeróbicas al oxígeno, es de vital importancia realizar su cultivo de manera que se erradique el oxígeno tanto de la preparación del medio de cultivo y soluciones, como de la inoculación y crecimiento de los mismos. Es por ello que algunas medidas utilizadas en el cultivo de anaerobios incluyen la utilización de materiales de vidrio en contraposición de plásticos, el colocar los cultivos en cámaras especiales que evitan el intercambio de gases y utilizar gases como nitrógeno, dióxido de carbono, helio, entre otros, para saturar la atmósfera (Strobel, 2009). En el trabajo aquí presente, se emplearon dos métodos de aislamiento y cultivo distintos. El primero se basa en la utilización de jarras de anaerobiosis e indicadores de oxígeno mientras el segundo se basa en la utilización de medio fluido de tioglicolato y parafina. Esto para posteriormente, analizar la morfología y el número de las bacterias encontradas. Metodología Se pesó 1g de muestra de suelo y esta se transfirió a un erlenmeyer con 99mL de solución salina estéril. Se calentó mediante baño maría durante 10 minutos a 85°C y posterior al enfriamiento del mismo, se realizaron diluciones 10-3 y 10-4 utilizando solución salina estéril. Se inoculó por vaciado 1mL de cada dilución en cajas Petri estériles; el medio utilizado fue agar BHI.