Adn recombinante

BIOTECNOLOGIA:
Es todo uso comercial o alteración de organismos, células o moléculas biológicas para alcanzar un objetivo práctico. La biotecnología tradicional (como el uso de levaduras o bacterias para fermentar o la selección de semillas) ha existido mucho tiempo atrás, la biotecnología moderna utiliza la INGENIERIA GENETICA o manipulación de la información genética a través de herramientas y técnicas, por ejemplo suprimir, adicionar o cambiar genes. Los objetivos principales son:
Aprender sobre procesos como la herencia y expresión de genes
Buscar alternativas de tratamientos a enfermedades genéticas
Generar ventajas no solo económicas sino también sociales con la producción de moléculas valiosas, para humanos y las demás especies, ejemplo vacunas, medicamentos, proteínas, etc.
Generar especies mejores para la agricultura o ganadería.
Una de las herramientas que emplea la ingeniería genética es la tecnología del ADN recombinante.

TECNOLOGIA DEL ADN RECOMBINANTE
ADN RECOMBINANTE: creación de nuevas combinaciones de segmentos o moléculas de ADN que no se encuentran juntas de manera natural, las moléculas proceden de distintas fuentes biológicas.
Procesos básicos:
Producir los fragmentos de ADN utilizando enzimas de restricción (endonucleasas tipo II)
Unión de los fragmentos de restricción a unas moléculas de ADN denominadas vectores, los mismos que pueden replicarse autónomamente en una célula huésped. El vector con el ADN insertado, es ya recombinante
El vector recombinante es introducido en una célula huésped, con el fin de que se replique, produciendo copias idénticas, denominados clones
Las células se multiplican y cada célula hija recibe además el vector recombinante, creándose una población de células idénticas (colonia)
Recuperar el vector y el ADN de interés desde la célula y el vector, para analizarlo, secuenciarlo, etc.
También, este mismo procedimiento puede ser empleado para hacer expresión del ADN insertado, en tal caso en la célula huésped, el ADN se transcribe a ARNm y se traducirá a proteína, este producto puede igualmente ser recuperado desde la célula huésped.

VECTORES DE CLONACION
Sea que se utilice un plásmido, bacteriofago (fago), un cósmico, o cromosomas artificiales de bacterias (BAC) o de levaduras (YAC) todos los vectores de clonación deben reunir algunas características, para poder unirse al fragmento de ADN que se quiere clonar o expresar, debe poder ingresar, permanecer y multiplicarse dentro de la célula huésped, para generar los clones. Estas características son:
Debe poder replicarse junto con el segmento de ADN que porta, para ello requiere tener un ORI (origen de replicación interna)
Debe tener sitios de corte con las enzimas de restricción, presentes una sola vez en el vector, para que el ADN a insertar que habrá sido cortado con la misma enzima, puedan ser insertados en el vector.
Debe tener un marcador de selección, para poder distinguir a las células huésped que poseen el vector recombinante de las que no lo tienen, entre los marcadores están genes de resistencia a antibióticos, que luego se colocan en el medio de cultivo de las células huésped, así las que captan el vector recombinante resisten y forman colonias, en tanto las que no poseen son sensibles y mueren.
El vector debe ser fácil de recuperar desde las células huésped.

TECNICAS DE RASTREO Y TRANSFERENCIA (BLOT)
CARACTERISTICAS DE LAS SONDAS
Las sondas empleadas en las técnicas de transferencia y rastreo, denominadas también BLOT o BLOTTING, SOUTHERN para ADN, NORTHERN para ARN, COLONY para buscar un ADN clonado en una colonia de bacterias y WESTERN para proteínas, deben cumplir los siguientes requisitos:
Para ADN y ARN
Ser poli u oligonucleótidos (más de 20 nucleótidos para garantizar la especificidad)
Ser complementarias al ácido nucleíco que buscamos: ADN o ARN y antiparalela respecto al mismo.
Estar en simple cadena (monocatenarias)
Tener un sistema de marcado que permita su revelado y visualización ejemplo: radioactividad, fluorocromos, etc.

Para proteínas se emplean anticuerpos, específicos para la proteína que se busca, e igualmente con un sistema de marcado para revelar su presencia.